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蓝舌病(Bluetongue, BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起，由库蠓等昆虫传播的反刍动物非接触性传染病；主要侵害绵羊、山羊。BTV中存在大量的基因变异和抗原变异，导致其有26个不同的血清型，并且同一血清型内含有大量的变异毒株。由于不同血清型间缺乏有效的交叉免疫保护，这为有效的多价疫苗的研究带来困难。血清型特异性诊断方法的研究对控制BT有重要意义。BTV VP2蛋白是决定病毒血清型特异性的主要结构蛋白，在本研究中，我们通过杆状病毒表达系统表达真核重组BTV16VP2蛋白，并以此为免疫原免疫BALB/c小鼠制备了两株针对BTV16型VP2蛋白血清型特异性单克隆抗体(MAbs)。为鉴定两株型特异性MAbs所识别的抗原表位，我们设计了87对引物(每对引物编码16个氨基酸，87对引物覆盖BTV16型VP2蛋白全长，相邻两对引物含有5个氨基酸重叠区，以最大限度保持VP2蛋白上的线性表位)，通过原核表达方法表达出87条麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽，以此作为包被抗原通过间接ELISA方法筛选两株MAbs所识别的表位区域，并利用肽扫描技术合成一系列逐渐缩短的短肽来确定两株MAbs所识别的最小表位区域：MAbs3G10识别34EWSGHDVTEIPNRRMF49；MAbs2B4识别543DPYVKRTVK555。对所鉴定表位在BTV16型不同地区分离株、BTV1-26个血清型以及呼肠孤病毒科环状病毒属内的代表病毒进行氨基酸序列比对，结果显示所鉴定的两个表位在16型内不同毒株间是高度保守的，而在BTV不同血清型间及同一病毒属内的不同病毒之间差异明显。所制备的两株型特异性MAbs以及两个BTV16VP2蛋白线性B细胞表位为血清型特异性诊断方法的建立和表位疫苗的设计奠定了基础。研究发现尽管宿主机体产生的大部分中和抗体是针对VP2蛋白的，但VP5蛋白也影响BTV的血清型，可能是通过在病毒粒子外衣壳上影响VP2蛋白的空间构象而间接发挥作用。最近研究发现仅有VP2蛋白，尽管能够诱导机体产生中和抗体免疫应答，却不能为宿主提供抵抗BTV感染的有效保护。然而，当VP2和VP5联合使用时(不管是以重组蛋白还是以重组病毒的形式免疫机体)，保护率大大提高。但是到目前为止，VP5和VP2蛋白协同影响免疫保护反应的机制还不完全为人所知。目前，关于体液免疫中宿主机体所识别的VP5蛋白上的B细胞表位鲜有报道，在本研究中我们制备了五株针对16型病毒VP5蛋白MAbs，并通过原核表达方式表达一系列涵盖VP5蛋白全长的MBP融合短肽来确定MAbs所识别的B细胞表位。并通过肽扫描技术合成一系列短肽进行精确定位，最终鉴定三个B细胞表位： MAb3B11和3G9识别310ITANTREIQHIKEE323； MAb4A6识别188STMVKEYRQKIDALKA203；MAb2B10识别265LSGID269。氨基酸序列比对结果显示所鉴定的三个表位在BTV16型内不同毒株间是完全保守的。所制备的MAbs及其所识别的表位为进一步研究VP5蛋白功能，深入探讨在机体免疫应答中VP5蛋白所发挥的作用奠定了基础。