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自Saha等(2001)发现肝再生磷酸酶(Phosphatase of regenerating liver，PRL-3)的表达与肿瘤恶性程度显著相关，提示PRL-3可能参与肿瘤转移以来，其在肿瘤转移方面的功能研究已越来越深入。但绝大多数研究的重点是PRL-3如何影响其他分子的表达或活性并最终促进肿瘤的转移，而对于PRL-3为何在高转移的肿瘤细胞中高表达以及它的表达受哪些因素的调控却鲜见报道。本文就此展开研究。
在第一章中，首先比较了不同人源肿瘤细胞株中PRL-3的表达情况，发现Jurkat细胞中的PRL-3表达水平较高，于是以Jurkat为对象，通过RLM—Race方法克隆鉴定了PRL-3基因的5非翻译区，确定了转录起始位点，为进一步研究PRL-3的转录调控打下了基础。接着将克隆到的PRL-3的5非翻译区序列与数据库中PRL-3的cDNA序列结合起来，得到了完整的PRL-3 cDNA序列。通过与数据库中DNA序列的比对，发现PRL-3基因包含6个外显子，第一外显子为转录起始点开始的28个碱基，但它不参与翻译。第二和第六个外显子部分序列与另外三个外显子共同组成522个碱基的CDS区，编码173个氨基酸的PRL-3蛋自。为了进一步研究PRL-3的功能，对PRL-3基因的编码区进行了克隆。测序发现，Jurkat细胞中的PRL-3基因存在着三种转录产物，其中一个转录产物未见报道。序列比对分析发现，与完整的PRL-3转录产物相比，另两个转录本各缺失了一段75bp和72bp的翻译区序列，但都没有改变密码子阅读框，蛋白产物与完整的相比各少了一段内部的氨基酸序列。为了考察这段减少的氨基酸序列是否影响PRL-3促肿瘤转移的功能，我们克隆了这三种转录产物，并构建了与绿色荧光共表达的载体，功能方面的研究还在进行之中。
在第二章中，我们以第一章克隆鉴定出的人源PRL-3基因的转录起始点为基础，找到基因组DNA相对应的起始点，以该点为+1，克隆了其上游2207bp至下游527bp之间的2734bp的片段，将其作为PRL-3的转录调控区域，并亚克隆到PGL-3-Basic载体上，构建了PRL-3启动子荧光素酶报告基因载体。将其转染到人胚肾上皮细胞293T中，检测荧光素酶的表达情况，证实我们克隆的片段有很高的转录活性。接着我们通过截短克隆分析来寻找PRL-3核心启动子区域，并成功地将核心调控位点定位到了一段32bp的序列上。对该段序列进行转录因子结合位点的预测、细致的克隆分析以及EMSA胶迁移阻滞实验验证，发现NFAT5是人源PRL-3基因转录调控的一个关键转录因子，并用PMA/Ionomycin刺激活化Jurkat细胞初步验证了NFAT5对PRL-3的转录调节作用，这为深入研究PRL-3的转录调控提供了重要的线索。
总之，本研究通过RLM—Race方法确定了人源PRL-3基因的转录起始位点，对PRL-3基因及其转录产物进行了分析，为深入研究PRL-3的功能奠定了基础；克隆了PRL-3的启动子序列，发现了其转录调控的关键转录因子NFAT5，为进一步探讨PRL-3的表达与肿瘤转移之间的关系提供了重要的分子基础。