论文部分内容阅读
目的：主要研究具有明显调节骨代谢作用的重组人甲状旁腺素(Recombinant Human Parathyroid Hormone,rhPTH)药物对造血系统损伤的保护作用。分为四个部分：①研究rhPTH对小鼠骨髓造血干细胞动员的作用；②研究rhPTH对慢性苯中毒小鼠造血损伤的改善作用；③研究rhPTH对免疫诱导的急性再生障碍性贫血模型小鼠造血损伤的改善作用；④研究rhPTH对免疫诱导的慢性再生障碍性贫血小鼠造血损伤的改善作用。
方法：⑴正常C57BL／6J小鼠分为两组,rhPTH处理组连续7天接受80μg／kgrhPTH腹腔注射,生理盐水对照组注射等容积生理盐水,第8天采用血细胞分析仪检测外周血细胞数量,用集落培养法测定外周血中的造血祖细胞,流式细胞仪分析外周血中CD34+细胞,ELISA法测定血清中粒细胞集落刺激因子(Granulocyte-Colony Stimulating Factor,G—CSF)和基质细胞衍生因子1(StromalCell Derived Factor1,SDF-1)。⑵皮下注射苯油混合液制作慢性苯中毒造血系统损伤模型,将模型小鼠随机分为3组:生理盐水治疗组、40μg／kg rhPTH治疗组和80μg／kg rhPTH治疗组,每周5次腹腔注射相应剂量rhPTH或生理盐水,共给药3周。使用外源性脾结节法检测造血干细胞；集落培养法测定骨髓造血祖细胞；血细胞分析仪检测外周血细胞数量；称重法测定脾脏系数。⑶DBA／2J小鼠淋巴结和胸腺的淋巴细胞以2:1比例混合,尾静脉注射于6.0 Gyγ射线照射的Balb／c小鼠,制作急性再生障碍性贫血模型。rhPTH治疗组每周5次腹腔注射80μg／kg rhPTH,生理盐水对照组注射等容积生理盐水,从造模前2周至造模后1周,共计给药3周。以CD34+细胞水平反映造血干细胞；以集落培养法检测骨髓造血祖细胞；血细胞分析仪测定外周血细胞数量:称重法测定脾脏系数。⑷DBA／2J小鼠的单纯淋巴结细胞,尾静脉注射于5.0 Gyγ射线照射的Balb／c小鼠,制作慢性再生障碍性贫血模型。rhPTH治疗组每周5次腹腔注射80μg／kg rhPTH,对照组注射生理盐水。在造模前1周开始直到造模后33天,共计给药6周。以CD34+细胞水平反映骨髓造血干细胞；集落培养法测定骨髓造血祖细胞；血细胞分析仪检测外周血细胞数量；称重法测定脾脏系数；细胞周期反映骨髓细胞DNA增殖情况。
结果：①经80μg／kg rhPTH连续7天给药的rhPTH处理组小鼠的外周血白细胞、外周血祖细胞以及外周血干细胞均显著高于生理盐水对照组(p<0.05),而血清中G-CSF和SDF-1两种细胞因子在两组之间无统计学差异。说明rhPTH可以促进骨髓造血干／祖细胞的动员,但不是通过增加G-CSF和SDF-1介导的。②与生理盐水对照治疗组相比较,经过rhPTH治疗的慢性苯中毒小鼠的造血干细胞数显著增加(p<0.05),而脾脏系数明显降低(p<0.05)。但是反映造血干细胞进一步分化的骨髓造血祖细胞以及外周血细胞数量在各组之间没有显著性差异。③模型小鼠较正常小鼠骨髓造血干细胞、骨髓造血祖细胞、外周血细胞数量以及脾脏系数等明显减少,说明免疫诱导的急性再生障碍性贫血小鼠的模型制作成功。与生理盐水对照治疗组相比较,经过rhPTH治疗的急性再生障碍性贫血小鼠的造血干细胞比例显著增高(p<0.05)；而其它指标如骨髓造血祖细胞、外周血细胞数量和脾脏系数等无显著性差异。④经过rhPTH治疗的慢性再生障碍性贫血模型小鼠的造血干细胞数量和脾脏系数显著增高(p<0.05),并且反映骨髓细胞DNA分裂增殖能力的指标S-G2-M期的细胞比例明显升高(p<0.05)；而骨髓造血祖细胞和外周血细胞数量并没有显著增加。
结论：⑴rhPTH促进骨髓造血干／祖细胞动员,但没有发现这种动员作用是通过细胞因子G-CSF和SDF-1介导产生。⑵在三个造血损伤模型中,rhPTH明显提高模型小鼠造血干细胞数量,但对进一步分化的造血祖细胞以及外周血细胞无影响。⑶rhPTH对造血系统损伤具有一定的保护作用,其用药剂量、给药方案以及适用的疾病模型还需要进一步研究。