【摘 要】
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色泽是金针菇的重要性状之一,受一对等位基因的控制.该研究以FLl9(黄色)、8801(白色)及其后代(F1代、F2代)菌株和相应单核菌株为材料,通过对金针菇DNA提取方法和RAPD扩增条件
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色泽是金针菇的重要性状之一,受一对等位基因的控制.该研究以FLl9(黄色)、8801(白色)及其后代(F1代、F2代)菌株和相应单核菌株为材料,通过对金针菇DNA提取方法和RAPD扩增条件的优化,建立了一套适于金针菇RAPD反应的反应体系:在此基础上,通过RAPD分析和BSA法相结合,成功的筛选到一个与金针菇白色基因紧密连锁的RAPD标记S3751800,并根据序列分析结果将RAPD分子标记转化为重复性和特异性更好的SCAR分子标记.主要结果如下:1.DNA提取条件优化通过正交实验设计,在4个因子(菌丝培养方式、菌丝处理方式、氯化苄浓度、SDS浓度)的3个水平共9个处理方面对氯化苄法提取DNA进行了探讨,所提取的DNA在OD260处的数据结果和电泳结果均显示,处理3(菌丝静止培养,液氮研磨,氯化苄浓度为5ml/g菌丝,SDS浓度为20％)效果明显优于其它8个处理.2.RAPD扩增条件优化运用单因素筛选方法,分别对不同的Mg2+浓度、模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度以及不同的退火温度进行了筛选,最后得到金针菇PCR扩增的最佳反应体系为:2.5μl Buffer,2mM MgCl2,50ng DNA,0.2 μM Primer,100uM dNTP,1.25U Taq酶,最后用无菌超纯水补至25u 1.3.色泽基因的RAPD标记筛选 根据BSA法的原理,分别从黄、白色菌株中选取5株(单核4株,双核1株),提取菌丝DNA混合组成两个基因池,然后用200个10碱基对的随机引物进行RAPD多态性分析,筛选到一个稳定的多态性标记S3751800,通过对FL19、8801及其后代共75株单核菌株和13株双核菌株的验证,证明该标记与白色基因是紧密连锁的.4.RAPD标记转化为SCAR标记对上述RAPD标记S3751800片段进行了克隆和两端测序,并根据序列分析结果将上述RAPD分子标记转化为重复性和特异性更好的SCAR分子标记.利用该标记对F1代单核菌株,以及不同来源的32个双核菌株和其中6株的90个单核菌株分别进行了验证,证明了SCAR标记的可靠性,同时说明用SCAR标记可以快速、准确的鉴别出金针菇颜色的基因型,从而可以有效地指导白色金针菇品种选育,加速育种进程.
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