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目的:探讨经尾静脉移植骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs)对幼鼠慢性肾功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)肾小球内皮细胞的修复和血管新生的影响;同时通过对大鼠肾组织Akt及P-Akt蛋白表达水平的检测探讨BM-MSCs促血管生成的作用机制,为BM-MSCs移植在延缓慢性肾疾病进展中的应用提供新的理论依据。方法:1、选取体质量为(50±10)g雄性Wistar幼鼠长骨骨髓作为BM-MSCs的供体,经密度梯度离心法以及贴壁培养法于体外分离培养筛选出纯化的鼠BM-MSCs,经过细胞形态、细胞表型、多向分化潜能等生物学特征鉴定培养的细胞为鼠BM-MSCs;2、腺嘌呤(Adenine)200mg/(kg·d)灌胃法制作幼鼠CRF模型;3、按随机数字表法将40只雄性Wistar幼鼠分为3组:(1)正常对照组:通过尾静脉注射1mlPBS溶液;(2)慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure,CRF)组:造模成功24h,通过尾静脉注射1mlPBS溶液;(3)BM-MSCs移植组:造模成功24h,通过尾静脉注射法将1×106个BM-MSCs移植进入CRF模型鼠体内;4、分别于注射后1d、7d、14d各处死1只移植GFP标记的BM-MSCs的大鼠,取新鲜肾脏,快速冰冻切片机制片后再在荧光显微镜下观察肾组织中GFP蛋白的表达;5、注射BM-MSCs 8周后,收集尿液和血液用于检测24h尿蛋白(24h proteinuria)、血肌酐(Serum Creatinine,SCr)、血尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN),收集肾组织用免疫组化方法检测肾小球JG12阳性细胞的表达情况,ELISA法监测血清及肾组织匀浆中VEGF的表达情况,Western Blot检测肾组织中Akt、p-Akt蛋白的表达。结果:1、取培养至P3代的鼠BM-MSCs并通过实验室内的流式细胞仪器多次检测显示鼠BM-MSCs表型CD90抗原阳性细胞表达率大于95%,CD45抗原阳性细胞表达率小于4%。分别经成脂还有成骨细胞分化诱导生长后,观察到红色的脂滴、钙化结节形成,这些符合鼠BM-MSCs的特点,证明成功分离筛选出鼠BM-MSCs;2、成功以Adenine 200mg/(kg·d)灌胃法制作幼鼠CRF模型;3、荧光显微镜下观察发现GFP阳性的BM-MSCs。BM-MSCs移植后7天,发现绿色荧光在肾小管分布,14天后绿色荧光逐渐减弱;4、BM-MSCs移植明显降低了肾脏系数。BM-MSCs移植组BUN、SCr的含量较CRF组明显降低(p<0.05)。24hUpro降低,但同PBS+CRF组相比差异没有统计学意义。CRF大鼠肾小球中JG12表达较Control组显著地降低(p<0.05),移植鼠BM-MSCs后肾小球中JG12表达有所增加(p<0.05),血清VEGF的含量升高。三组肾组织中总的Akt蛋白表达没有区别,MSCs+CRF组中p-Akt蛋白表达与PBS+CRF组比较有显著性差异(p<0.05)。结论:1、BM-MSCs逐渐定位于肾组织;2、BM-MSCs能减轻Adenine引起的CRF幼鼠的肾组织损伤,减少尿蛋白的排泄,改善肾功能失调;3、BM-MSCs移植增加了CRF大鼠肾脏的肾小球毛细血管密度;其保护作用机制可能是BM-MSCs旁分泌VEGF,激活PI3k-Akt信号通路,促进肾小球毛细血管内皮细胞增殖修复、肾组织血管新生。