柚皮素增强抗人DR5单抗对人肝癌细胞系HepG2的凋亡作用

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背景:针对人DR5受体的特异性单克隆抗体,是近年来被誉为最有前景的抗肿瘤药物。DR5抗体药物也即将上市,但是其存在的间题也随之而来,DR5在人体内的分布不同,表达也不同,人们思考怎样才能最大发挥其抗癌疗效。柚皮素是一种广泛存在于植物和中药中的天然黄酮类化合物。有研究显示发现其具有多种药理活性,主要有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、DNA修复作用等。本研究以HepG2细胞为研究对象,选用柚皮素和本实验室制备的mDRA-6单抗合用来探讨二者联合诱导肿瘤细胞调亡的协同作用。目的:探讨柚皮素增强抗人DR5单克隆抗体对人肝癌细胞系HepG2的凋亡作用及可能机制。方法:MTT法检测柚皮素及抗人DR5单抗对人肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用,Annexin V/PI双染分析细胞凋亡,WB蛋白免疫印记检测Caspase8的表达,流式细胞术检测HepG2细胞表面DR5的表达。结果:1.MTT法检测结果表明,10mg/L的:nDRA-6作用于HepG2细胞12h,细胞增殖抑制率为39%,10mg/L的mDRA-6分别与200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L柚皮素共同作用于HepG2细胞,细胞增殖抑制率分别增加为58%、79%、85%;2. Annexin V/PI双染,流式细胞术检测结果表明2mg/L的mDRA-6作用细胞12h,细胞凋亡率为16.77%,2mg/L的mDRA-6和400μmol/L柚皮素共同作用于HepG2细胞12h,细胞凋亡率增加为62.66%;3.免疫印迹技术检测显示,mDRA-6和柚皮素共同作用于HepG2细胞后,蛋白免疫印记显示Caspase8的激活片段明显;4.流式细胞术检测HepG2细胞表面DR5的表达,其基础表达率为42%,400μmol/L柚皮素作用于HepG2细胞12后,HepG2细胞表面DR5的表达率增加为73%。结论:柚皮素增强抗人DR5单克隆抗体对人肝癌细胞系HepG2的凋亡作用,其可能机制为柚皮素诱导HepG2细胞表面DR5受体表达上调所致。
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