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目的:建立用乙醇抽提+沉淀吸附法提取山楂中熊果酸(ursolic acid,UA)的工艺,并探讨山楂熊果酸对高脂血症小鼠的降血脂作用、对环磷酰胺(CTX)造成的免疫功能低下小鼠的保护作用以及熊果酸对HepS肝癌细胞凋亡的影响。
方法:先用乙醇反复浸提山楂匀浆得到粗品,再用D型大孔树脂二次提纯得精制品,经鉴定纯度后将其制成颗粒为纳米级的乳浊液备用。分别采用75%的蛋黄乳和高脂乳剂灌胃小白鼠建立高脂模型,观察不同剂量水平(300mg/kg、7.5mg/mL、50mg/kg)的熊果酸对模型小鼠血清指标胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的影响。腹腔注射CTX形成免疫抑制模型,观察上述三种剂量水平的熊果酸对模型小鼠的免疫活性的影响,包括白细胞数、腹腔巨噬细胞的吞噬百分率、脾淋巴细胞增殖活力、脾指数;从肝癌小鼠腹腔抽取对数生长期肿瘤细胞,用二苯胺法、流式细胞术和DNA凝胶电泳法检测不同剂量(20、30、40、50ug/mL)的熊果酸对肿瘤细胞凋亡的影响。
结果:质谱结果显示从山楂中所提物质为熊果酸,熊果酸经鉴定纯度达98.1%。与75%的蛋黄乳高脂模型组相比,三个剂量熊果酸能降低TC、TG指数,对HDL都没有表现出明显的调节作用。与高脂乳剂高脂模型组相比,高脂乳剂治疗组和高脂乳剂预防组均能一定程度地降低高脂乳剂小鼠的TC、TG、LDL的值,升高HDL的值。预防组效果要比治疗组更好一些。与CTX模型对照组小鼠相比,三个剂量的熊果酸均能显著升高外周血的白细胞数;增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能;能促进脾淋巴细胞增殖,增加脾指数。10ug/mL、20ug/mL的UA对DNA断裂百分率的影响比较小,30、40ug/mL的UA对DNA断裂百分率的影响比较显著。凝胶电泳检测到DNA“梯带”同时四个剂量的熊果酸均能显著增加肿瘤细胞的凋亡率:流式细胞仪检测到30ug/mL、40ug/mL、50ug/mL,的熊果酸均能显著增加HepS肝癌细胞的凋亡率。
结论:熊果酸提取工艺可靠,熊果酸对高脂血症小鼠有一定的降脂作用。熊果酸对CTX造成的免疫抑制小鼠有显著的正作用,对HepS肝癌细胞凋亡有显著促进作用。