【摘 要】
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目的:双微体(double minute chromosomes,DMs)是基因扩增的主要细胞遗传学标志,是染色体外遗传单位的一种主要存在形式。研究表明,DMs与衰老、基因组不稳定、肿瘤及耐药密切
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目的:双微体(double minute chromosomes,DMs)是基因扩增的主要细胞遗传学标志,是染色体外遗传单位的一种主要存在形式。研究表明,DMs与衰老、基因组不稳定、肿瘤及耐药密切相关。针对肿瘤细胞传代培养过程中DMs数量及基因扩增的稳定性及其相关机制的深入研究对于肿瘤遗传学的发展及其临床应用有着重要的意义。
方法:本实验室对人卵巢癌细胞UACC-1598进行了单细胞克隆的挑取和培养,建立了多个亚系,对其进行传代培养。应用中期染色体制备后DMs计数的方法确定不同克隆中的DMs数目所在范围,初步确定DMs计数相对多的两个细胞亚系克隆1/4,和DMs计数相对少的两个细胞亚系克隆7/18。随后经过传代培养,检测DMs数目是否有稳定性。并通过半定量PCR及Real-time PCR等方法检测MYCN,EIF5A2基因的扩增倍数和表达产物在不同克隆间,以及同一克隆在传代以后,是否存在稳定性。初步确定单克隆细胞中DMs数目以及细胞中癌基因扩增及表达情况的稳定性。
结果:培养鉴定了DMs数目不等的UACC-1598细胞单克隆。验证DMs数目与MYCN/EIF5A2基因的扩增情况呈正相关。且同一单克隆细胞亚系在短期传代培养过程中,MYCN/EIF5A2基因扩增程度及表达水平没有差异。不同单克隆细胞亚系中,MYCN/EIF5A2基因扩增程度及表达水平有差异。
结论:综合DMs数目变化与两种基因扩增情况,我们发现在DMs数目不等的UACC-1598细胞单克隆中,DMs数目相对稳定,并且与相关基因的扩增及表达情况呈正相关。而且短期传代培养过程中,DMs的数目和相关基因扩增及表达程度都有一定的稳定性。
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