论文部分内容阅读
目的本实验以碘海醇(200mgI/ml)干预体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)建立细胞损伤模型,观察碘对比剂(iodinated contrast media, CM)致人肾小管上皮细胞损伤中的自噬现象,并初步探讨自噬在CM致人肾小管上皮细胞损伤和凋亡中的作用。方法1.碘海醇(200mg Ⅰ/m1)分别干预HK-2细胞3h,6h,建立细胞损伤模型。Westen Blot检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白Atg7的表达变化。干预6h后,LC3Ⅱ-FITC荧光共聚焦显微镜观察LC3Ⅱ标记的自噬体形成,透射电镜观察细胞自噬体形成。2.碘海醇(200mgⅠ/ml)干预HK-2细胞6h建立细胞损伤模型,应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)10mmol/1共处理细胞抑制自噬。同上采用Westen Blot检测LC3Ⅱ、Atg7表达；细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞损伤程度；Annexin Ⅴ-FITC结合流式细胞计数检测细胞凋亡比例。结果1.碘海醇(200mg Ⅰ/ml)干预6h后,透射电镜可观察到HK-2细胞质内自噬体的增多,共聚焦显微镜下观察到LC3Ⅱ标记的自噬体的形成。与正常对照组相比,碘海醇干预组HK-2细胞3h、6h白噬相关蛋白LC3Ⅱ、Atg7表达显著上调(P<0.05),并呈时间依赖性。2.3-MA可明显抑制HK-2细胞自噬,单纯3-MA干预组与正常对照组相比,以及碘海醇+3-MA干预组与单纯碘海醇干预组相比,自噬标志蛋白LC3Ⅱ以及Atg7表达均明显下调(P<0.05,P<0.05)。同时,与单纯碘海醇干预组相比,加用用3-MA抑制自噬后,细胞上清液LDH明显升高(P<0.05),HK-2细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论1.碘对比剂(碘海醇,200mgⅠ/ml)呈时间依赖性诱导HK-2细胞发生白噬。2.自噬抑制加重碘对比剂所致的HK-2细胞损伤和凋亡。3.自噬激活可能减轻碘对比剂所致的HK-2细胞损伤和凋亡,对HK-2细胞具有保护作用。