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本文主要围绕葛根有效部位--葛根总黄酮展开研究。制备了葛根总黄酮提取物,制定了其质量标准并进行了稳定性研究。然后从葛根的功效入手,选择中医临床解肌退热的经典药对--“柴胡葛根”作为研究对象,从化学成分、退热作用、药物动力学等方面探讨柴胡葛根有效部位药对配伍的影响。
按课题组前期优选的工艺,采用水提-壳聚糖澄清-大孔树脂纯化法,制备了葛根总黄酮,纯度大于60％,得率约8％。本文对葛根总黄酮提取物进行了质量控制研究,包括的性状检查、薄层鉴别等,并分别建立了葛根素和葛根总黄酮含量测定方法。高效液相色谱法测定葛根素的色谱条件为:Kromasil Cis色谱柱,流动相为甲醇一水(26:74),流速为1.0ml/min,检测波长为250nm,平均加样回收率为99.5％,三批中试提取物的含量分别为30.16％、28.21％、30.59％;紫外分光光度法测定葛根总黄酮的检测波长为250nm,平均加样回收率为100.7％,三批中试提取物葛根总黄酮的含量分别为68.77％、67.18％、72.06％。在此基础上,本文制定了葛根总黄酮提取物的质量标准。
参考《中国药典》2005年版二部附录XIX C“原料药与药物制剂稳定性试验指导原则”及《中药、天然药物稳定性研究技术指导原则》中的方法进行葛根总黄酮提取物稳定性研究,其中包括影响因素试验、加速试验、长期试验等。影响因素研究表明葛根总黄酮提取物在强光和高温条件下比较稳定,但具有一定的吸湿性,其临界相对湿度为70％。因此葛根总黄酮提取物在贮存、运输时应密闭保存,防止吸潮。加速试验和长期实验结果均表明,在试验条件下贮存三批葛根提取物中葛根素和总黄酮含量无明显变化,该研究结果为制定原料药有效期和储存条件提供依据。
参考文献,分别采用醇提一大孔吸附树脂纯化法和水蒸气蒸馏法从柴胡中提取柴胡总皂苷和柴胡挥发油。以柴胡皂苷a为对照品,香草醛-冰乙酸-高氯酸法显色测得该浸膏中总皂苷含量约为52％。将柴胡有效部位与葛根总黄酮配伍,研究药对配伍对葛根有效成分以及药效学、药动学的影响。
采用HPLC法测定葛根总黄酮配伍柴胡有效部位前后葛根素含量的变化。结果表明,配伍后葛根素的含量与葛根总黄酮液相色谱特征峰无显著性差异。
采用大肠杆菌内毒素耳缘静脉注射建立家兔内毒素发热模型,研究葛根总黄酮及柴胡有效部位配伍前后的退热作用。结果表明,柴葛合用时,不仅退热效果好(与模型组比较,P＜0.01),而且持续时间长(与柴胡组比较,P＜0.05),故两者合用效果佳。
本文还考察了葛根总黄酮与柴胡有效部位配伍前后,经灌胃给药后葛根素在家兔体内的药物动力学过程。以对羟基苯甲酸甲酯作为内标,HPLC法测定给药后血浆中葛根素的血药浓度,利用DAS 2.0软件,计算不同给药的药动学参数。结果表明,单用葛根总黄酮时,葛根素在家兔体内的药动学过程符合二室模型,葛根素的分布半衰期为1.60 h,消除半衰期为6.65 h,在检测时间下血药浓度-时间下的面积为11.22 mg·h·L-1;当柴葛合用时,葛根素在家兔体内的药动学过程不能用房室模型来拟合,应采用非房室模型,用统计矩方法计算药动学参数,结果为葛根素的半衰期为8.92 h,达到最大血药浓度的时间为0.67 h,最大血药浓度为1.76 mg/L,在检测时间下血药浓度-时间下的面积为9.57 mg·h·L-1。