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猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪的一种高度接触性肠道传染病，以呕吐、腹泻和食欲下降为基本特征，各种年龄阶段的猪可能感染，但仔猪最易感。该病最初发现时发病率高，死亡率较低，但是近年来PEDV引起山东的仔猪腹泻爆发，病死率达100%。为了有效防治该病，本研究建立了检测PEDV的荧光定量PCR诊断方法和检测PEDV抗体的间接ELISA检测方法。本研究共分为三个部分：1PEDV荧光定量PCR的建立根据PEDV的M基因序列，本研究合成了针对该序列的Taqman探针和引物，建立了检测PEDV的绝对荧光定量PCR方法，绘制了标准曲线方程为Y=-2.146X+22.769，各个参数为Slope=-2.146，扩增效率：E=10-1/斜率-1=10-1/-2.146-1=192.433%，相关系数：R2=0.994。试验证明该方法特异性强、重复性好、灵敏度高、最低可检测到10copies/μL。应用建立的荧光定量PCR对来自山东省的40份临床呈腹泻症状的病料进行了检测，检测出30份PEDV阳性，检出率为75%，说明PEDV引起山东省大部分猪场的仔猪腹泻的原因之一。2PEDV N基因的原核表达本试验设计引物，以PEDV山东流行株DZ12-3为模板，扩增了全长的N基因，并连接到pET-30a载体上，构建了重组表达质粒，导入表达菌E.coli BL21(DE3)，通过对表达时间，诱导剂的使用量，温度等条件的摸索，使构建的pET30a-PEDVN质粒在BL21中大量稳定的表达，并且最佳的表达条件确定为1mM/mL的IPTG，37℃，220r/min，表达6h时表达量最大。经过Ni-Agarose柱纯化获得纯度较高的目的蛋白，Western blot检测表明，表达的重组N蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性反应，不与其他常见猪病阳性血清发生反应，说明该蛋白具有一定的反应原性。3PEDV间接ELISA方法的建立和应用本研究使用纯化的原核表达N蛋白为包被抗原建立了检测猪体内PEDV抗体的间接ELISA方法。优化条件为N蛋白最佳包被量为750ng/孔，最佳包被条件为使用碳酸盐缓冲液（0.05mol/L, pH9.6）、4℃包被12h，被检猪血清最佳稀释度为1:100，抗体最佳反应时间为37℃,1h，显色液的最佳终止时间为室温15min，阳性的Cut-off值为0.465。以建立的间接ELISA方法对采自山东省的320份PEDV疫苗免疫猪血清进行抗体检测，结果表明总的抗体阳性率为62.81%，母猪抗体阳性率为72.2%，仔猪抗体阳性率为46.1%，表明疫苗免疫的抗体阳性率不高；检测德州2个未免疫PEDV疫苗的猪场120份血清，统计结果显示，总的感染抗体阳性率为36.7%，母猪的感染抗体阳性率为42.9%，育肥猪感染抗体阳性率为28.0%，表明猪场中存在PEDV野毒的普遍感染；通过对某猪场免疫PEDV疫苗后抗体跟踪监测显示，7d后抗体开始上升，28d左右达到最高，35d后出现下降，整体抗体水平不高，表明PEDV疫苗免疫保护时间较短，保护效果不佳。