大豆ASR蛋白及其保守结构域短肽A1~A5对生物大分子保护作用研究

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ASR蛋白是第7组LEA蛋白,是生物体中一类与渗透调节相关的蛋白家族。当植物受到干旱、低温、高盐和ABA等逆境胁迫时,ASR蛋白会大量表达,以减轻逆境对植物造成的伤害。研究ASR蛋白的抗逆保护作用,确定ASR蛋白的抗逆功能结构域,对于理解ASR蛋白在植物抗逆反应中的分子机制具有重要意义。大豆ASR(Gm ASR)蛋白属于ASR蛋白家族中的一种,由238个氨基酸组成,含5个高保守结构域。本文设计并合成了Gm ASR系列短肽A1~A5。冻融胁迫条件下,Gm ASR蛋白及其系列短肽A1~A5能阻止乳酸脱氢酶(LDH)的失活及聚集。通过Filter-Trap实验验证了Gm ASR蛋白及其系列短肽A1~A5对Htt Q53(亨廷顿疾病相关蛋白)有抗聚集作用。可见,Gm ASR蛋白及其短肽对蛋白质的保护作用未表现出特异性的选择。这是Gm ASR蛋白保护植物细胞的方式之一。Gm ASR蛋白含有高比例的组氨酸(9.8%),每个保守结构域都富含组氨酸。组氨酸是一种可与金属离子结合的氨基酸,然而Gm ASR的高保守结构域中这些组氨酸是否可与金属离子结合,如何影响其抗氧化能力还不得而知。本文通过固相金属螯合亲和层析实验证明Gm ASR蛋白及其系列短肽A1~A5可与Cu2+和Cd2+结合;采用Cu-抗坏血酸盐系统检测Gm ASR蛋白及其系列短肽A1~A5具有清除羟基自由基能力,证明短肽所含组氨酸数目与它们清除羟基自由基能力成正相关,且与短肽的长度有关;还证明了Gm ASR蛋白及其系列短肽A1~A5能保护DNA免受羟基自由基的氧化伤害。此外,本文证明Gm ASR蛋白在结合Cu2+后将发生可逆性聚集沉淀,推测这可能是Gm ASR蛋白减轻离子对植物细胞毒害的重要方式之一。表明Gm ASR蛋白可作为细胞内的金属离子缓冲剂,稳定由Cu2+胁迫造成的细胞内离子失衡,这也是Gm ASR蛋白保护植物细胞的方式之一。
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