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[背景]IgA肾病(IgA Nephropathy,IgAN)是肾小球疾病最常见的病理类型,以大量IgA在肾小球系膜沉积为主要特征。20-40%的患者将会进入慢性肾功能衰竭。IgAN的发病机制目前仍不十分清楚。近年来对扁桃体与IgA肾病之间关系的研究已成为肾脏病领域较为关注的问题之一。研究发现IgA是对病毒,细菌或者食物抗原而产生的抗体,部分IgA肾病患者在上呼吸道感染及扁桃体感染后常有血尿及蛋白尿的加重,部分患者扁桃体摘除是延缓IgA肾病进展的有效治疗手段之一,这些发现说明IgA肾病患者的扁桃体可能是导致IgA肾病的致病源。国内外多项研究提示IgA肾病的发生与上呼吸道尤其是扁桃体对环境中存在的细菌或病毒抗原的粘膜免疫反应异常有关,而扁桃体单个核细胞在其中起着非常重要的作用。前期我们分离鉴定了37例IgA肾病病人和37例非肾炎慢性扁桃体炎病人的扁桃体隐窝细菌,所有病人均检测到甲型链球菌(a-Hemolytic streptococcus, HS)。因此我们选择甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖体外刺激IgA肾病病人扁桃体单个核细胞,探讨IgA肾病组病人扁桃体单个核细胞IgA及IgA1的产生。研究表明一些细菌和病毒感染能诱导激活诱导的胞嘧啶脱氨酶(activation-induced cytidine deaminase, AID)的表达从而增强类别转换(class switch recombination,CSR)的发生,如从IgM类别转换到IgA使得IgA生成增多。研究表明Ig胚系转录是CSR的起始步骤,胚系转录本(germline transcript)产生后可以和Ig基因组形成不稳定的三聚体,从而使相应局部的基因保持开放状态,使得该部分基因得以转录和表达。IgA肾病扁桃体B淋巴细胞Ig alpha重链启动相关基因Iα-Cα胚系转录本及激活诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID)的表达是否与1gA产生异常有关,目前尚不清楚。本实验研究了IgA肾病组和非IgA肾病组扁桃体单个核细胞Iα-α胚系转录本、激活诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID) mRNA及蛋白水平的表达,以探讨IgA肾病扁桃体单个核细胞IgA及IgA1产生异常的分子机制。[目的](1)体外模拟上呼吸道感染对扁桃体单个核细胞的刺激作用,观察灭活甲型链球菌菌株、细菌脂多糖对IgA肾病病人扁桃体单个核细胞分泌IgA、IgA1的影响。(2)研究IgAN组与对照组扁桃体单个核细胞IgA类别转换相关基因及蛋白的表达,从基因及蛋白水平探讨IgAN组扁桃体单个核细胞IgA及IgA1产生异常的分子机制。[方法](1)收集6例IgAN病人及6例非肾炎慢性扁桃体炎病人手术摘除的扁桃体。(2)分离培养两组病人腭扁桃体单个核细胞并提取部分细胞总RNA及蛋白。(3)制备甲型链球菌灭活菌株。(4)甲型链球菌灭活菌株、脂多糖刺激体外培养扁桃体单个核细胞72小时后收集细胞培养上清液,ELISA检测IgA、IgA1的表达。(5)提取甲型链球菌灭活菌株、脂多糖刺激体外培养72小时后扁桃体单个核细胞的总RNA及蛋白。(6)实时定量荧光PCR检测Iα-Cα胚系转录本(Iα-Cαgermline transcript)、激活诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID) mRNA的表达。(7) Western-blot检测激活诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID)蛋白水平的表达。[结果](1)IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞体外培养72小时上清液IgA分泌增加,但差异无统计学意义(p>0.05)。10μg/ml脂多糖、1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株分别刺激72h后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA分泌显著增加,差异有统计学意义(p<0.05,p<0.01)。(2)IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA1分泌稍有增加,但差异无统计学(p>0.05)。10μg/ml脂多糖、1×108cfu/ml甲型链球菌火活菌株分别刺激72h后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA1分泌增加,差异有统计学意义(p<0.05,p<0.0)。(3)1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株刺激72h后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞体外培养上清液IgA1/IgA比例上调,差异有统计学意义(p<0.05)(4)IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞Iα-Cα胚系转录本mRNA的表达上调,10μg/ml脂多糖、1x108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株分别刺激72h后更明显,差异有统计学意义(p<0.01,p<0.05,p<0.05)。(5)IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞AID mRNA水平的表达上调,10μg/ml脂多糖、1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株分别刺激72h后更明显,差异有统计学意义(p<0.05,p<0.01,p<0.01)。(6)IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞AID蛋白水平的表达上调,差异有统计学意义(p<0.05),10μg/ml脂多糖、1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株分别刺激72h后更明显,差异有统计学意义(p<0.01,p<0.01)。[结论] (1)甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖刺激后,IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA、IgA1产生明显增加。(2)甲型链球菌灭活菌株刺激后IgA肾病组扁桃体单个核细胞体外培养上清液IgA1/IgA比例上升。提示IgA肾病患者的扁桃体免疫可能存在过高的应答状态导致IgA及IgA1产生增多。(3)IgA肾病病人扁桃体单个核细胞Iα-Cα胚系转录本基因表达水平、激活诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID)基因及蛋白表达水平上调,甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖刺激后更明显,提示Iα-Cα胚系转录本及AID促使类别转换可能与IgA肾病病人扁桃体IgA产生异常有关。