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鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumanni，Ab）是医院感染的重要病原菌，主要引起医院获得性肺炎，尤其以重症监护病房（ICU）发病率最高。近年来，随着抗菌药物上市时间的延长和临床应用的不断推广，鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的耐药性不断增加。碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌（Carbapenem-resistant Acinetobacterbaumanni，CRAB）的出现，被认为是二十一世纪耐药领域的“哨兵事件”，其临床检出率逐年增多。然而，细菌耐药的增长速度远远超过新的抗菌药物的研发速度。CRAB常表现出泛耐药的临床特征，抗感染方案可选择的抗菌药物十分有限，临床疗效并不满意，从而极大地延长了患者的住院时间，增加了患者的归因死亡率。那么，在可选择抗菌药物匮乏的背景下，非抗菌药物治疗能否作为辅助治疗措施而提高临床疗效呢？研究表明，健康人体的支气管/肺泡灌洗液为弱碱性，当肺部感染时则转为酸性。其次，环境pH值变化对一些细菌的生物活性具有一定的影响。那么，环境pH改变会导致CRAB生物学活性发生怎样的变化？目前尚无研究报道。本课题完成了以下研究工作：1、分析某综合性医院ICU鲍曼不动杆菌的分布规律及耐药性变迁目的：分析西京医院近3年来所有专科ICU患者各类感染标本中鲍曼不动杆菌的分布及对抗菌药物的耐药情况，为指导临床合理制定抗感染方案、增高疗效提供理论依据。方法：对2010年1月～2012年12月西京医院所有专科ICU患者各类感染性标本分离的病原菌资料进行回顾性分析。结果：4633株病原株中鲍曼不动杆菌1054株，2010～2012年其所占比例分别为20.57%、21.26%及25.94%。在标本中的分布以痰液为主，占所有感染性标本的80%以上。在药敏结果中，鲍曼不动杆菌耐药性最低的是多粘菌素B，其次为米诺环素和头孢哌酮/舒巴坦；对其他抗菌药物耐药率均在60%以上，其中对亚胺培南和美罗培南耐药率呈现逐年上升趋势。结论：鲍曼不动杆菌主要引起呼吸道感染，其对大部分临床常用抗菌药物耐药严重，治疗上应根据药敏结果选择敏感的抗菌药物，并加强抗菌药物的合理使用。2、环境pH值对碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌体外增殖活性的影响目的：了解环境pH对CRAB体外增殖活性的影响，为临床有效治疗CRAB提供参考。方法：收集临床痰液标本中分离出CRAB42株，分别用pH值为6.9、7.4和7.9的MH肉汤配制成5×105cfu/mL的菌液。将上述菌液分别加到灭菌的96孔平板中，每孔200μl。置于35℃温箱中过夜培养20h，用酶标仪于630nm处测定每孔的OD值。结果：3种不同pH值的菌液培养20h，用酶标仪所测OD均值分别为pH6.9组0.555±0.200、pH7.4组0.523±0.187、pH7.9组0.512±0.174。以pH6.9组作为对照，pH7.4及7.9组OD均值下降具有统计学意义，P<0.05。结论：环境pH值对CRAB的体外增殖活性有影响，与pH值为6.9的偏酸性环境相比，pH值为7.4、7.9的碱性环境抑制了CRAB的体外增殖活性。3、环境pH值对头孢哌酮/舒巴坦联合米诺环素体外抗碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌敏感性的影响目的：了解pH值对头孢哌酮/舒巴坦（2:1, CSF）联合米诺环素（MNO）在体外抗CRAB药物敏感性的影响。方法:42株CRAB及pH值为6.9、7.4和7.9的MH肉汤同实验2。采用棋盘法设计，微量肉汤稀释法测定在3种不同pH值MH肉汤中，不同浓度头孢哌酮/舒巴坦、米诺环素及两者联合对42株CRAB的最低抑菌浓度（MIC），并计算部分抑菌浓度（FIC）指数。结果：在pH值由6.9升高到7.4及7.9时，两药单用，CSF的MICG值逐渐降低（各组P<0.05），而MNO的MICG值则逐渐升高（各组P<0.05）；两药联用，FIC指数≤1的百分比分别是23.81%、11.90%、28.59%，1<FIC指数≤2的百分比分别是73.81%、88.10%、71.43%。结论：在pH值7.9的碱性环境中，单用CSF或与MNO联用的抗菌活性均增强。两药联用对CRAB主要表现为无相关作用。4、探讨碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌耐药的分子机制及环境pH值对其耐药基因表达水平的影响目的：了解西京医院CRAB常见耐药基因碳青霉烯酶OXA-23、OXA-51及外排泵系统adeB、外膜蛋白carO的携带情况，探讨pH值对外排泵adeB及外膜蛋白carO基因表达量的影响。方法：普通PCR法检测42株CRAB碳青霉烯酶OXA-23、OXA-51及外排泵系统adeB、外膜蛋白carO，并进行分析及测序；选取同时携带有adeB、carO基因的CRAB10株及4株临床Ab敏感株、1株标准株（ATCC BAA-747），用pH值分别为6.9、7.4、7.9的MH肉汤过夜培养20-24h，实时荧光定量PCR测定其adeB、carO基因的Ct值，用2-CT法计算各目的基因的相对表达量。结果:42株CRAB carO基因检测发现40株阳性，阳性率为95.2%，adeB、OXA-23、OXA-51基因检测阳性率均为100%。以标准株BAA-747作为对照，10株CRAB与4株临床敏感株adeB基因相对表达量分别为：37.34±41.89、1.55±1.77；carO基因相对表达量分别为：0.38±0.34、4.80±3.87。与敏感株相比，CRAB adeB基因表达量增加，carO基因表达量下降，并且均具有统计学意义，P<0.05。不同pH值组间比较，以pH值7.4组作为对照，pH值6.9组与pH7.9组adeB基因相对表达量为：1.20±3.23、1.26±0.97；carO基因相对表达量为：1.07±1.18、1.26±1.02。两组之间无统计学意义（P>0.05）。结论：产OXA-23、OXA-51型碳青霉烯酶以及外排泵adeB的过度表达、外膜蛋白carO表达的下降在本院大多数CRAB中同时存在，这种多种耐药机制共存的现象是西京医院下呼吸道感染CRAB广泛耐药的重要原因。环境pH值在6.9、7.4、7.9时，对CRAB adeB、carO基因水平的表达无明显影响。上述研究结果表明，环境pH值对CRAB的体外增殖活性及药物敏感性均有影响。与pH值为6.9的酸性环境相比，pH值为7.4、7.9的碱性环境抑制了CRAB的增殖活性。在pH值7.9的碱性环境中，单用CSF或与MNO联用的抗菌活性均增强。环境pH值在6.9、7.4、7.9时，对CRAB adeB、carO基因水平的表达无明显影响。