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为了探讨环境因子对由凡隆气单胞菌引起的罗非鱼运动气单胞菌败血症(简称MAS)发生的影响,本研究综合应用了细菌分离鉴定技术、组织病理学技术、免疫组织化学技术、电镜技术、ELISA和PCR等技术研究了罗非鱼凡隆气单胞菌病的病理学特性及环境对发病的影响。结果如下:
患出血性败血症罗非鱼自然病例的临床症状、大体剖检变化和组织病理学调查结果提示病原可能为气单胞菌的成员。水环境对MAS发病的调查结果显示临床的水温升高(从17℃升到30℃)、低溶氧(低于3mg/L)、高氨氮(高于2.5mg/L)、高亚硝酸氮(大于0.4mg/L)和高有机物浓度(高于30mg/L)的池水更容易诱发罗非鱼的气单胞菌败血症。
本研究在国内首次通过形态学、生理生化特性和16SrDNA高变区鉴定了从典型病例分离的病原为凡隆气单胞菌温和生物型,并在Genbank注册了4个16SrDNA高变区。凡隆气单胞菌温和生物型占分离株的95.6%,且以弱毒株为主(68.4%)。临床分离的弱毒代表株—凡隆气单胞菌温和生物型BJCP-5(简称BJCP-5)成功地复制出MAS。BJCP-5分泌的26KDa的具有溶血活性、细胞毒性和肠毒性的外毒素是重要的毒力因子。
以BJCP-5为模式株研究了环境因子对细菌毒力(包括生长生存、黏附、产溶血素、侵染和致动物死亡能力)和罗非鱼免疫机能(包括血清杀菌活性、血细胞吞噬能力和血清抗体凝集效价)的影响,结果表明临床发病的高温、低溶氧、高氨氮和高亚硝酸氮、发病池水及细菌初始定植点的营养条件不同程度地提高了细菌毒力和抑制了宿主防御机能。该结果首次系统地为凡隆气单胞菌温和生物型的条件致病性提供了直接的理论依据,为罗非鱼凡隆气单胞菌败血症的环境控制提供了参考。
为了寻找能用于鱼类的新型促生长剂和抗感染剂,探讨了两种植物寡糖(葡苷寡糖和半乳甘露寡糖)和三种动物(鸡、猪和兔)肠道抗菌肽对幼龄罗非鱼生长和BJCP-5感染的效应,结果表明五种测试物以100mg/kg剂量伴料投喂对幼年罗非鱼有促生长和增加对BJCP-5感染的抗性的作用,且抗黏附是其机制之一。该结果提示这五种物质是有前景的用于鱼类的抗生素替代品。