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精原干细胞(spermatogonial stem cell)是雄性动物生殖腺内的一群具有高度自我更新能力和多向分化潜能，能向子代传递遗传信息的细胞。由于精原干细胞在医学、遗传学、转基因动物研究等方面有着广阔的应用前景，近年来已经成为众多学者研究的热点。但是精原干细胞在体外很难长期维持，这成为进一步研究的障碍。本研究通过分离、纯化及鉴定新生牛精原干细胞，对其体外培养体系进行了优化，并且导入人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因，以期促进增殖，延长其在体外的细胞寿命。研究获得如下结果：
1．通过两步酶消化法分离获得的新生牛睾丸细胞平均存活率为89.00％，精原干细胞比率为21.61％，细胞贴壁率为23.34％。
2．分离的新生牛睾丸细胞经过Percoll密度梯度离心纯化，结果显示：精原干细胞主要分布在27％～35％Percoll梯度中，纯度可达69.27％。
3．新生牛精原干细胞集落细胞化学和免疫组化鉴定表明：碱性磷酸酶表达呈弱阳性，Integrinβ1和C-kit表达呈阳性；RT-PCR鉴定表明：新生牛精原干细胞表达精原干细胞特异基因gfrα1和c-kit。
4．通过优化新生牛精原干细胞体外培养体系表明：在培养基中添加2.5％FBS，10μg/L LIF、20μg/L SCF、80μg/L GDNF以及支持细胞以5.0×10<5>个/mL密度接种作为饲养层时，能显著促进精原干细胞增殖。
5．新生牛精原干细胞通过脂质体法转染pCl-Neo-hTERT载体，600 μg/mL G418筛选获得阳性细胞。端粒酶活性检测显示：该阳性细胞OD<,450/630>是未转染细胞的4倍；生长曲线表明：该阳性细胞在体外的群体倍增时间缩短了1.9倍。
以上结果证明，两步酶消化法结合Percoll密度梯度离心分离纯化新生牛精原干细胞能满足进一步研究的需要；通过优化培养体系和转染hTERT基因能显著促进新生牛精原干细胞在体外的增殖。