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自身免疫性疾病(autoimmune diseases，AID)是一类复杂的多基因系统性疾病，其发病可能与DNA的氧化损伤密切相关，但其中的机制尚不完全清楚。hMYH基因作为一种重要的DNA糖基化酶，主要负责修复8-OHdG造成的氧化损伤，从而避免突变以及疾病的发生。本研究的目的便是通过确认本实验室首次发现的hMYH基因IVS15+479insAluYb8多态性变异，通过病例-对照研究的方法，分析hMYH基因这一变异与AID发病风险的关系。同时通过制备hMYH重组基因表达蛋白来检测AID患者血清中hMYH自身抗体水平，继而进一步探讨hMYH基因变异与AID发病的相关性。
本研究的第一部分主要是通过PCR扩增hMYH基因intron15 DNA片段，通过琼脂糖凝胶电泳分离、克隆测序等方法，分析、确认hMYH基因IVS15+479insAluYb8多态性变异(电泳分析显示，hMYH基因intron15呈现出二种不同的片段，长片段为800多bp，短片段为500bp；人群中存在三种基因型，分别为纯合插入型(I I)、纯合野生型(WW)以及杂合型(W I)。测序分析，大于800bp的长片段比500bp的短片段多出一段326bp的Alu插入序列，带有24bp PolyA尾巴，隶属于AluY家族的亚型AluYb8。进一步通过病例对照研究396例AID患者和839例普通对照中该多态性位点基因型分布和等位基因频率的差异，以及与年龄、性别、疾病分布的关系，采用Pearson未校正卡方统计法统计。总体分析发现，三种基因型在AID组和对照人群中的分布有着显著差异(P=0.011)；AID组的等位基因I的频率显著高于对照组(P=0.0022)，优势比OR=1.3(95％CI1.1～1.54；P<0.005)；纯合子Ⅱ基因型发生导致AID发生的风险明显增加(P=0.0085)，OR=1.461(95％CI1.1～1.94)P<0.01)，这一作用在中老年亚组(年龄≥145岁)中更为显著，OR=1.577(95％CI1.009～2.464；P<0.05)。而且，携带I等位基因的I I基因型和杂合WI基因型相对于野生WW基因型也表现出增加AID风险的作用(OR=1.356)95％CI1.045～1.760；P<0.05)。但在AID患者按性别、疾病分组后，在各亚组中未发现显著增加风险的作用(P>0.05)。
在本研究的第二部分中，主要是以hMYH基因为模板，设计引物构建了pET28a-hMYH的重组质粒(EcoR1，Xhol双酶切插入)，并在大肠杆菌BL21-plys(BP)内进行蛋白表达。成功获得hMYH基因产物C端的大约23KDa的一个多肽片段。在证实其包涵体表达后，进行了包涵体变复性得到可溶性表达产物。该重组蛋白经过间接ELISA和Western Blotting验证均为正确表达，未有移码现象产生。用此重组蛋白作为抗原，运用间接ELISA法来对AID病人血清进行筛选检测hMYH自身抗体水平。由于缺乏有关定量阳性报道，选用人工合成的hMYH(C-16)P(靠近hMYH基因C端)多肽进行对比筛查作为内参，重点考察其与重组蛋白筛查结果的相关性。选用Spearman等级相关方法对检测结果进行分析发现，针对人工合成hMYH多肽或hMYH重组蛋白，AID组与正常对照组hMYH抗体检测数值比较均具有显著统计学意义(RAID=0.315，P<0.0001；Rcontrol=0.226，P<0.001)。人工合成多肽筛查AID组和对照组的总体均数用Wilcoxon两样本秩和比较法计算两者间存在统计学差异(P<0.0001)；同法计算重组蛋白筛查结果一样存在统计学意义(P=0.0017)。我们取重组蛋白筛查数据的对照组95百分位数(P95=1.328)作为疑似阳性参考线，超过此数值以上列为本实验中疑似阳性对象。结果在189例AID(重组蛋白筛查)患者中，检测出23例(12.17％)阳性；在190例对照(重组蛋白筛查)中仅检测出9例(4.74％)。使用Pearson未校正卡方统计法计算，具有显著统计学意义(P=0.0093)。表明AID组中hMYH自身抗体阳性率明显高于正常对照组，提示具有一定的病因学意义。同时结合hMYH基因AluYb8插入多态性分析，hMYH自身抗体阳性的AID患者中，Alu插入纯合型(I I)的检出频率与野生纯合基因型(WW)相比具有统计学意义(P=0.0366)，提示该hMYH基因变异(IVS15+493insAluYb8)可能与hMYH自身抗体的产生有关。
本研究首次在中国人群中确认了hMYH基因多态性变异IVS15+479insAluYb8，我们推测hMYH基因该多态性可能增加了AID发病的风险性，并且随年龄的增加发病风险越高。同时在AID患者血清中发现存在较高的hMYH自身抗体阳性率，且与多态性变异IVS15+479insAluYb8有一定联系。