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目的:在中医理论指导下,以中医古籍中经典方剂为基础,以中医病症“肺痈”、“脓血”、“咯血”为关键词,对具有缓解和治疗肺痈的方剂进行筛选和优化;并运用细胞生物学、分子生物学等科学技术手段,通过对A549细胞增殖抑制作用的研究,初步揭示优选方剂在体外发挥作用的机制。 方法:中医认为肺癌与肺痈、咯血、脓血、息贲、肺萎等病症相类似,因此以经典古籍《普济方》、《圣济总录》、《景岳全书》等为基础,以“肺痈”、“脓血”、“咯血”为关键词进行方剂筛选,所筛方剂在省名老中医认为应有临床疗效的方剂基础上进行加减,为做进一步验证,对加减方所含药材在备选方剂中出现的频次进行统计和分析,确定最优组方。为考察优选方剂对A549细胞的抑制作用及其机制,本研究利用CCK-8法考察优选方剂对A549细胞生长的抑制作用;DAPI染色法、AnnexinⅤ/FITC-PI双染法考察优选方剂对A549细胞的凋亡作用并利用流式细胞术对A549细胞周期进行分析;利用qRT-PCR、Western Blot技术,对目的基因p53、Bax、Bcl-2、p21、CDK2、Cyclin A的蛋白及mRNA的表达量进行检测;利用Rhodamine123检验A549细胞线粒体膜电位变化。 结果:1.筛选出以缓解肺痈、咯血、脓血等病症为目的的人参五味子散,并在省名老中医的建议下对加减方中中药出现频次进行统计和分析,得到人参五味子散加减。2.利用CCK-8法考察细胞活力,结果表明:相同浓度下人参五味子散加减与人参五味子散相比,人参五味子散加减对A549细胞的活力影响更大;人参五味子散加减在浓度2-8mg/mL范围内对A549细胞增殖有明显抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系。3.细胞凋亡及其周期结果表明:人参五味子散加减作用A549细胞后,细胞发生凋亡,其染色质固缩、核碎裂,且凋亡率呈剂量依赖;人参五味子散加减可诱导A549细胞周期阻滞在S期。4.qRT-PCR结果显示,目的基因p53、Bax、p21的mRNA的表达量增加,Bcl-2的mRNA的表达量降低,与对照组相比均有统计学意义。5.Westem blot结果显示,目的基因p53、Bax、p21的蛋白表达量增加,Bcl-2、CyclinA、CDK2蛋白表达量降低,与对照组相比均有统计学意义。6.由于目的基因Bcl-2、Bax作用位点在线粒体上,故对A549细胞线粒体膜电位进行考察,发现人参五味子散加减作用A549细胞后,细胞线粒体膜电位呈下降趋势。 结论:筛选出以缓解肺痈、咯血、脓血等病症为目的的人参五味子散,通过对优选方剂的统计和分析,得到人参五味子散加减;通过体外实验研究,初步揭示人参五味子散加减在体外对A549细胞增殖的抑制作用,可能是通过p53信号通路诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期实现的。