甘蓝型油菜应答核盘菌侵染早期表达模式分析

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hbl20062
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
油菜菌核病是我国油菜上的重要病害,目前还没有全免疫的抗病品种。在分子水平上了解油菜(Brassica napus)与核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)在侵染早期的互作过程,对抗病育种有重要意义。本研究利用抑制差减杂交(SSH)技术,结合反向northern筛选,对接种后0.5-8.5小时油菜差异表达片段进行了初步分析。研究的主要内容如下: 1.取菌丝块接种后0.5-28.5小时(隔4小时取材一次)的叶片作为阳性材料,同时取等量未接种的叶片作为阴性材料,阳性材料与阴性材料各自等量混合,提取mRNA,采用抑制差减杂交技术构建了正反向富集菌核病早期抗性相关基因片段的差减cDNA文库。正向文库含含1920个克隆,反向文库含1008个克隆。插入片段大小约在300bp-900bp,大部集中在500-600bp。粗略估计富集1000倍。 2.接种核盘菌0.5、4.5、8.5小时叶片和相同时间段的未接种叶片的总RNA做探针,与cDNA点阵膜杂交,筛选接种与未接种材料在相同时间段基因表达差异,推定为抗病相关基因。得到50个非重复EST序列。从其功能看,50个ESTs序列分属于初级代谢、能量代谢、次生代谢、抗病防御、细胞结构、转录因子、蛋白质合成、信号转导等生命过程,关系到抗病反应过程包括参与氧爆发过程、茉莉酸途径,细胞保护和抗病防御有关代谢反应途径等。18个基因片段在GenBank尚不能推断其功能。通过对上述基因功能的分析,推断甘蓝型油菜抗核盘菌早期可能主要依赖氧爆发和茉莉酸途径;结合相关基因在不同时间段的表达变化,对它们对应的蛋白在相应反应途径上的相互作用作了初步的分析和推断。 3.对cDNA点阵膜杂交差示筛选的3个代表不同种类的克隆进行了不同时间段的Northern杂交验证及表达变化分析,结果不仅验证了cDNA点阵杂交的正确性,还通过分析这些基因在不同时间段的表达变化,展示不同类型基因表达模式存在差异。
其他文献
一年中,我投入了相当多的时间和精力进行散文阅读.在浩如烟海的作品中徜徉,选择什么,不选择什么,是一种主张,一种立场.在这风云变幻、潮起潮落的时代,在未经历史沉淀的散文现
蜜蜂要分窝了,这迹象是大姐最先察觉的.大姐在碎房里梳头.一缕阳光从窗口斜溜进来,铺苫在窗台上的一片圆镜面上,大姐的脸就映在小小的镜儿里.阳光一照,大姐的脸上显出一层细
1rn尚未进腊月,县城已笼罩在一片萧瑟之中.路上行人渐少,一场大风雪之后,光秃的树愈发显得孤单.乐阳幼小的身影缓缓向前移动,怎么看都像只落单的鸟.rn
吴宓先生是20世纪中国人文学术史上誉满中外的一代宗师。他博古通今,学贯中西,集文学、史学、哲学于一身;他是中国传统文化的薪火传人和坚执的守护者,是中国比较文化(文学)
Aim: To develop an artificial neural network (ANN) model for predicting skin permeability (log Kp) of new chemical entities. Methods: A large dataset of 215expe
“敏敏,醒醒.”妈妈的手抚过唐敏的前额和柔顺的头发,她醒了,睁开了眼.她呆呆地望着母亲,神情恍惚.“做噩梦了吗?我听见你在说梦话,呼吸都乱了.”妈妈在唐敏的床边坐下来,右
1rn如同一缕凉风刮过一样,“咣叽”一声,储玉就风一般地走了.储玉是苏雪峰的老婆.刮风时挺凉,风过去了也就无所谓了.只是,苏雪峰的生活在单位在朋友眼里似乎显得更低调了些,
期刊
驴子的歌唱rn我家有一头毛色泛青的驴子,父亲叫它大青.rn大青是一头身架高大很有力气的驴子,干起活来哼哧哼哧的,不知疲倦.闲下来的时候,它就会自个儿溜达到黄河边一处水草丰
一个春日,从友人电话中得知何乃光同志辞世了,我由不得一愣,继而心绪不宁了几日.又过了几天,友人又告诉我刘钦斌同志也突然走了.这一下击得我目眩心跳.钦斌乃我友也,他和乃光