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目的诱捕受体3(Decoy receptor 3,DcR3)是肿瘤坏死因子受体超家族的新成员之一,在多种恶性肿瘤中呈现过表达。本文通过研究原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及肝癌细胞系中DcR3 mRNA和蛋白的表达情况及其与临床病理特征之间的关系,阐明DcR3在肝癌发生、发展及复发转移过程中的作用;同时探讨DcR3表达与肝癌细胞凋亡的关系;并且观察将DcR3中和性抗体加入表达该基因的肝癌细胞系后,肝癌细胞生长增殖、运动迁移、凋亡及对顺铂敏感性等各种细胞生物学特性的变化。材料与方法①应用半定量逆转录-聚合酶链反应RT-PCR方法,检测DcR3 mRNA在69例肝癌及癌旁组织中的表达和相对含量,分析DcR3 mRNA的相对含量与肝癌临床病理特征的关系。②125例HCC、48例癌旁、64例肝硬化组织和25例正常肝组织构建肝癌组织微阵列。应用免疫组织化学方法(EnVision法)检测DcR3蛋白的表达水平,并分析其与HCC临床病理特征的关系。③应用半定量RT-PCR,免疫组织化学,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)及DNA电泳技术检测39例HCC及癌旁肝组织中DcR3mRNA及蛋白的表达和凋亡情况,并分析DcR3表达与细胞凋亡的关系。④RT-PCR分析人肝癌细胞系HepG2,HepB3,SMMC-7721,bel-7402,bel-7405,癌旁肝细胞系QSG-7701及正常肝细胞系HL-7702 DcR3的mRNA水平;免疫细胞化学检测各个细胞系的DcR3蛋白表达水平;将DcR3中和性抗体加入肝癌细胞系中,通过MTT检测不同浓度DcR3中和性抗体作用于不同肝癌细胞存活率,挑选实验细胞株及DcR3中和性抗体最佳作用时间和作用浓度;免疫细胞化学检测DcR3中和性抗体加入后肝癌细胞DcR3蛋白表达差异;通过绘制细胞生长曲线以及集落形成实验来分析生长增殖特性;流式细胞仪(FCM)检测该抗体对细胞周期的影响;通过FCM,TUNEL染色,DNA ladder,电镜观察分析其对凋亡的影响;通过划痕实验分析DcR3对肝癌细胞迁移能力的影响;检测加入DcR3中和性抗体后hepG2对化疗药物顺铂敏感性的改变。结果①69例原发性肝细胞癌组织中,67例标本可扩增出426bp的条带,DcR3mRNA的阳性表达率为97.10%,明显高于癌旁组织DcR3 mRNA的阳性表达率76.81%(53/69,P＜0.01);癌组织中DcR3 mRNA相对含量明显高于癌旁组织(P＜0.01);序列分析发现其两例病例序列mRNA与源序列比较均有4个不同的碱基改变;DcR3 mRNA表达与转移复发和肿瘤大小有关,与年龄、性别、分化程度、临床分期、有无肝硬化、AFP、门脉癌栓、包膜浸润、肿瘤结节及HBsAg无明显相关。②组织微阵列利用率为96.56%(253/262);HCC组织中的DcR3蛋白的阳性率73.33%(88/120)明显高于癌旁54.17%(26/48,P=0.017)、肝硬化组织37.10%(23/62,P=0.000)以及正常肝组织8.70%(2/23,P=0.000)。癌旁组织和肝硬化组织中的DcR3蛋白阳性率明显高于正常肝组织(P=0.000,P=0.005);HCC中临床TNM分期Ⅰ,Ⅱ期DcR3阳性率61.76%(42/68)明显低于Ⅲ,Ⅳ期88.46%(46/52,P=0.001);HCC中无转移组DcR3阳性率58.82%(20/34)明显低于转移组96.67%(29/30,P=0.000);DcR3表达率在AFP≥400μg/L组80.82%(59/73)、有门脉癌栓组91.30%(42/46)、包膜浸润组84.34%(70/83)和多个肿瘤结节组89.13%(41/46)分别明显高于AFP＜400μg/L组61.70%(29/47,P=0.021)、无门脉癌栓组62.16%(46/74,P=0.000)、无包膜浸润组48.65%(8/37,P=0.000)及单个肿瘤结节组63.51%(47/74,P=0.002)。DcR3表达与年龄、性别、分化程度、有无肝硬化及肿瘤直径无关。③39例肝癌组织中,细胞凋亡指数(AI)及DNA ladder阳性率均明显低于癌旁组织(P=0.000);肝细胞凋亡与转移、临床分期和包膜浸润有关,与年龄、性别、分化程度、有无肝硬化、AFP、门脉癌栓、肿瘤大小、肿瘤结节及HBsAg无关。相关性分析显示AI与DcR3 mRNA及蛋白表达均呈负相关(r=-0.34,P=0.002;r=-0.679,P=0.000),与DNA ladder阳性率呈正相关(r=0.62,P=0.000)。DcR3 mRNA与蛋白表达呈正相关(1=0.419,P=0.000)。④5种肝癌细胞系中均有DcR3mRNA和蛋白的表达,癌旁肝细胞系QSG-7701及正常肝细胞系HL-7702均无DcR3mRNA和蛋白的表达;选择HepG2为实验靶细胞,DcR3中和性抗体最佳实验浓度为0.8mg/L,作用时间48小时;加入DcR3中和性抗体后,HepG2肝癌细胞株DcR3蛋白表达明显减弱;加入DcR3抗体的细胞其生长增殖能力和集落形成能力均显著下降(P＜0.01);DcR3中和性抗体使细胞周期阻滞在G1/S期(P＜0.01)。同时凋亡明显增加(P＜0.01);细胞迁移能力也明显被抑制(P＜0.01);加入DcR3中和性抗体后顺铂作用下肝癌细胞细胞增殖存活率明显下降(P＜0.01)。结论①原发性肝细胞癌组织和肝癌细胞系中,DcR3 mRNA和蛋白均表达增高。DcR3 mRNA和蛋白的高表达在原发性肝细胞癌的发生、发展及转移复发过程中可能发挥重要的作用;②原发性肝细胞癌DcR3 mRNA表达产物可能存在碱基改变;③应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的,具有快速、方便、经济、准确的特点;④DcR3的高表达可抑制凋亡;⑤DcR3中和性抗体能显著抑制肝癌细胞的生长和迁移并促进凋亡的发生并且能增加对顺铂的敏感性,提示该基因在肝癌的发生发展、凋亡及浸润转移中发挥重要作用,并有望在临床治疗中广泛应用。