两性霉素B调控HIF-1α活性影响缺氧环境下食管癌Eca-109细胞侵袭迁移能力的机制研究

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目的:研究在缺氧环境下,两性霉素B(AmB)对食管癌Eca109细胞侵袭迁移能力的影响及其可能的机制。方法:取常规培养的对数生长期Eca109细胞,分别加入0,1.25,2.5,5μg/mL的AmB,放入三气培养箱(37℃,3%O2,5%CO2,92%N2)中缺氧培养24h;采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力;采用Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力;采用实时荧光定量PCR检测各组细胞HIF-1α、E-cadherin及MMP-2mRNA表达水平;采用Western Blot检测各组细胞HIF-1α、E-cadherin及MMP-2蛋白表达水平。结果:划痕实验结果提示经过不同浓度AmB(1.25,2.5,5μg/mL)处理后,各实验组细胞迁移距离均减少(P<0.05);Transwell侵袭实验结果提示经过不同浓度AmB处理后,各实验组细胞穿过Matrige胶的数目均减少(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测结果显示经过AmB处理后各组细胞E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05),MMP-2的mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P<0.05),HIF-1α的蛋白水平均下调(P<0.05),但HIF-1α的mRNA水平无明显变化(P>0.05)。结论:缺氧条件下食管癌Eca-109细胞经过AmB处理后,细胞的迁移能力及侵袭能力会下降,其机制为调控HIF-1α活性及下游E-cadherin和MMP-2的表达。
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