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第一部分gC1qR对人卵巢癌细胞的凋亡作用及机制研究【目的】探讨球状C1q受体(gC1qR)基因对人卵巢癌细胞的凋亡作用,并探讨其潜在的分子机制。【方法】构建重组质粒pc DNA3.1-gC1qR,将pc DNA3.1-gC1qR重组质粒转染人卵巢癌SKOV3细胞株,采用Real time PCR及Western blot检测gC1qR基因的水平;采用流式细胞仪检测人卵巢癌细胞的凋亡情况;以分子探针2,,7,-二氯荧光黄双乙酸盐(H2DCFDA)测定细胞内活性氧(ROS)变化,新型荧光探针四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)检测线粒体膜电位的改变以及钙离子荧光探针(Fluo-3/AM)检测细胞内Ca2+浓度,以此评估人卵巢癌细胞线粒体功能的变化。【结果】转染pc DNA3.1-gC1qR质粒载体能显著诱导人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡,且呈现显著的细胞凋亡特征;转染pc DNA3.1-gC1qR质粒后,卵巢癌细胞线粒体中ROS含量,细胞内Ca2+浓度显著增高,线粒体膜电位显著减少。【结论】gC1qR基因致线粒体功能障碍,进而诱导卵巢癌细胞凋亡。第二部分紫杉醇/卡铂致卵巢癌细胞凋亡的分子机制【目的】探讨紫杉醇/卡铂对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡作用,旨在为阐明其潜在的分子机制。【方法】构建gC1qR小干涉RNA(gC1qR si RNA)沉默质粒,转染人卵巢癌细胞株,施以紫杉醇/卡铂作用,分别以Negative si RNA和α-硫辛酸作为相应的阴/阳性对照。采用Western blot检测gC1qR蛋白的水平;采用流式细胞仪检测人卵巢癌细胞的凋亡情况;以分子探针H2DCFDA测定细胞内ROS变化,新型荧光探针JC-1检测线粒体膜电位的改变以及Fluo-3/AM检测细胞内Ca2+浓度,以此评估人卵巢癌细胞线粒体功能的变化。【结果】紫杉醇/卡铂+gC1qR si RNA处理组和紫杉醇/卡铂+α-硫辛酸处理组,卵巢癌细胞凋亡率显著减少,且ROS水平,细胞内Ca2+浓度显著降低,而线粒体膜电位维持较高水平。【结论】gC1qR基因通过诱导线粒体功能障碍介导了紫杉醇/卡铂致卵巢癌细胞的凋亡。