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目的:食管癌是常见的消化道恶性肿瘤,我国是高发区,绝大多数是鳞癌。它的发生、发展、浸润和转移与多种因素有关,是一个多基因、多步骤共同作用的过程,但是具体的机制尚不明了。近些年来学者们注意到肿瘤免疫在其中发挥的重要作用,给食管癌的诊断和治疗带来了新的方向。2001年发现的FOXP3(forkhead box P3)基因和2003年发现的BTLA(B and T lymphocyteattenuator,BTLA)基因在肿瘤免疫中的作用越来越受到大家的关注。他们通过不同的机制但又相互联系着发挥免疫抑制作用。本课题的目的在于建立检测人FOXP3和BTLA mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定食管鳞癌患者组织中FOXP3和BTLA的基因表达水平,探讨FOXP3和BTLA基因表达水平与食管鳞癌发生发展的关系,以期给食管鳞癌的肿瘤免疫治疗提供一个新的方向。方法:收集临床手术切除的42例食管鳞癌标本和30例对照标本组织。基于TaqMan荧光探针技术,构建克隆载体pMD 18-T-FOXP3和pMD 18-T-BTLA作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法。在GeneAmp 7000型检测仪上测定42例食管鳞癌标本和30例对照标本组织中FOXP3和BTLA mRNA的含量。并且分析FOXP3和BTLA的表达与42例食管鳞癌患者临床、病理资料之间的关系。采用SPSS11.0统计软件进行统计分析,计量资料用(?)±s表示,两组之间比较采用t检验,FOXP3基因与BTLA基因在食管鳞癌中表达的相关性用直线相关统计分析,结果均以P＜0.05为有差异,具有显著意义。结果:FOXP3 mRNA在42例食管鳞癌标本的表达范围为3.4×10~4～5.3×10~6拷贝/μg RNA;30例对照标本的表达范围为5.6×10~2～1.2×10~4拷贝/μg RNA,食管鳞癌组FOXP3 mRNA的平均拷贝数显著高于对照组[(7.2±2.6)×10~5vs(6.8±3.4)×10~3;P＜0.01];BTLA mRNA在42例食管鳞癌标本的表达范围为5.8×10~3～2.7×10~5拷贝/μg RNA;30例对照标本的表达范围为2.5×10~2～6.1×10~4拷贝/μgRNA,食管鳞癌组BTLA mRNA的平均拷贝数显著高于对照组[(8.8±2.6)×10~4vs(9.2±3.4)×10~3;P＜0.01];FOXP3和BTLA mRNA在食管鳞癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小以及分化程度无关(P＞0.05),但是与患者的TNM分期、区域淋巴结转移有显著的相关性(P＜0.01)。结论:1、成功建立了检测人FOXP3和BTLAmRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法;2、食管鳞癌组FOXP3 mRNA的表达量高于对照组;3、FOXP3 mRNA表达量与患者的年龄、性别、肿瘤大小和分化程度无关,但与TNM分期、区域淋巴结转移有显著的相关性,有区域淋巴结转移或ⅡB～Ⅲ期的患者国FOXP3 mRNA表达量高于无淋巴结转移及Ⅰ～ⅡA期;4、食管鳞癌组BTLA mRNA的表达量高于对照组;5、BTLA mRNA表达量与患者的年龄、性别、肿瘤大小和分化程度无关,但与TNM分期、区域淋巴结转移有显著的相关性,有区域淋巴结转移或ⅡB～Ⅲ期的患者中BTLA mRNA表达量高于无淋巴结转移及Ⅰ～ⅡA期;6、食管鳞癌组织中FOXP3 mRNA含量与BTLA mRNA含量有正的直线相关关系,但相关性并不强,考虑两者之间还有其他许多因素的干扰。