论文部分内容阅读
冠状动脉疾病（CAD）是目前严重威胁人类身体的重大疾病之一,在病变部位置入药物洗脱支架（DESs）是迄今最好的治疗方法,可减少血管再狭窄的几率,但再狭窄率（ISR）并没有完全消除,因此,再狭窄的预防和治疗成为心血管疾病研究领域中的热点。如何实现快速内皮化和抑制平滑肌过度增生是目前预防再狭窄面临的两大挑战。本文通过体外细胞实验,探究新一代抗肿瘤药物托瑞米芬（TOR）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和血管平滑肌细胞（VSMCs）的细胞生物学行为的影响及其作用机制。本文主要研究内容及结果如下:（1）TOR影响内皮细胞生物学行为。研究表明TOR能抑制内皮细胞增殖且随着TOR浓度增大其抑制作用也逐渐加强;显著促进了内皮细胞的早期凋亡,晚期凋亡及细胞坏死;抑制内皮细胞的分裂并将细胞阻滞在G0G1期;延迟了内皮细胞的粘附时间却并未影响其粘附总数;显著抑制细胞的运动和迁移行为;≥7.5μM的TOR可以明显地改变细胞的形态结构。（2）TOR影响内皮细胞的机制。免疫荧光和免疫印记双重验证的方法检验PCNA、P53及Rho/ROCK信号通路的关键蛋白的表达量。研究结果表明:TOR浓度愈高,PCNA的表达量明显降低,暗示TOR抑制内皮细胞增殖的作用就愈明显;而P53的表达随TOR浓度的增加而增加,说明TOR是通过促进P53的表达而加速细胞的凋亡;TOR显著抑制了整合素Integrinβ1及Rho的表达,进而降低了ROCK信号通路中下游因子MLC和pMLC的表达水平。说明TOR可能是通过Integrinβ1-Rho-ROCK-（p）MLC信号通路抑制内皮细胞的迁移行为。（3）TOR影响平滑肌细胞生物学行为。研究表明该药物也能抑制平滑肌细胞增殖且随着浓度增大抑制作用逐渐增强;显著促进了平滑肌细胞的早期凋亡,晚期凋亡及细胞坏死;抑制平滑肌细胞的分裂并将细胞阻滞在G0G1期;延迟了平滑肌细胞的粘附时间并影响其粘附总数;显著抑制平滑肌细胞群体的运动和迁移行为;高浓度的TOR可以明显改变细胞的形态结构。（4）TOR影响平滑肌细胞的机制。采用免疫荧光和免疫印记双重验证的方法分别对PCNA,P53及Rho/ROCK信号通路中的关键蛋白的表达量进行分析,并运用流式细胞术对TOR影响平滑肌细胞的调亡行为作进一步的探讨。结果表明:随着TOR浓度增高,PCNA表达量明显降低,抑制平滑肌细胞增殖的作用就愈明显;而P53的表达随TOR浓度的增加而增加,说明TOR是通过促进P53的表达而加速细胞的凋亡;高浓度TOR促进了平滑肌线粒体膜电位下降进而使释放的活性氧水平升高,激活caspase3及9,最终促进了平滑肌细胞的凋亡。迁移机制的研究结果表明:TOR显著抑制了整合素Integrinβ1及Rho的表达,进而降低了ROCK信号通路中下游因子MLC和pMLC的表达水平。说明TOR可能是通过Integrinβ1-Rho-ROCK-（p）MLC信号通路抑制细胞的迁移行为。