论文部分内容阅读
目的翼状胬肉是我国常见眼表疾病之一，本病尚无有效的药物治疗，手术切除是目前治疗翼状胬肉的主要方法，但手术后并发症多且手术后的复发率很高，所以治疗相当棘手，因此进一步研究翼状胬肉的发病机制十分必要。本实验旨在研究翼状胬肉中COX-2与新生血管的表达情况，探讨COX-2在翼状胬肉新生血管生成和发展中的作用，为探索翼状胬肉的靶向治疗提供新的理论依据。方法使用苏木素-伊红染色（HE染色）法及免疫组化的方法对实验标本进行研究。第一步：临床收集组织标本用于切片制作。门诊手术获得正常球结膜组织23例，翼状胬肉组织45例，术前裂隙灯检查排除参与者其他角结膜性疾病。所有组织经过固定剂固定，浓度依次递升的乙醇脱水，使用石蜡包埋，组织切片，并做好标记并保存备用。第二步：HE染色法观察翼状胬肉与正常球结膜组织的形态学差异。取切片，经脱蜡后苏木素浸染5min，将细胞核染成蓝色，盐酸酒精分色后伊红染色10s，切片脱水、透明后中性树胶封片，显微镜下观察。第三步：免疫组织化学方法分别检测翼状胬肉和球结膜组织中COX-2、VEGF、PDGF与CD31分布及表达情况。取切片，经脱蜡后置于PH6.0的抗原修复液中高热修复6min，3％去离子水封闭内源性抗原，在不同组织编号的玻片上分别加入一抗，4℃孵育过夜，冲洗后加入对应二抗，DAB显色，显微镜下观察并计数。结果（1）HE染色后正常球结膜组织与翼状胬肉组织中形态学表现：正常球结膜组织表层上皮细胞排列整齐，基底上皮细胞边界清晰，间质血管少；翼状胬肉翼状胬肉组织表现为上皮层及基质浅层成纤维细胞增殖，表层上皮细胞排列紊乱，细胞体积增大，基底上皮边界模糊，间质中新生血管大量增生。（2）免疫组织化学方法分别检测翼状胬肉和球结膜组织中COX-2、VEGF、PDGF与CD31分布及表达情况：23例球结膜组织中均为呈阴性，翼状胬肉组织样本中有36例COX-2表达阳性(P <0.01)； CD31在两种组织中均有表达，通过计数及统计，翼状胬肉组织中MVD为20.3±4.4，球结膜组织中MVD为9.7±2.8(P<0.01)； COX-2表达阳性的翼状胬肉组织中MVD为19.06±1.84，表达阴性的翼状胬肉组织中MVD为10.44±2.98(P<0.01)。翼状胬肉组织切片中34例PDGF表达阳性，36例COX-2表达阳性的胬肉组织中32例PDGF阳性；翼状胬肉组织切片中39例VEGF表达阳性，36例COX-2阳性的胬肉组织中34例VEGF表达阳性；差异有统计学意义（P<0.005）。在促进翼状胬肉新生血管生成过程中COX-2的表达与血管相关因子VEGF和PDGF具有相关性(r＝0.458, r＝0.621)。结论本实验研究发现翼状胬肉组织中MVD、VEGF、PDGF以及COX-2的表达明显强于正常球结膜组织，另外，COX-2可能协同VEGF及PDGF共同刺激翼状胬肉新生血管的发生。以上结果不仅证实COX-2在翼状胬肉的发病中发挥重要的作用，同时进一步证实翼状胬肉属于紫外线诱导相关肿瘤性疾病。