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目的:1.观察激酶调控下的缝隙连接功能(gap junction, GJ)在缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。2.初步探讨IP3、Caspase-9、Caspase-3、Bax/Bcl-2在GJ介导的扩大损伤中的作用。方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型;Longa’s法评价大鼠神经功能损伤;TTC染色法检测大鼠脑梗死体积变化;HE染色法检测大鼠脑组织形态学变化;WesternBlotting法检测脑组织中缝隙连接蛋白Cx43、Cx32,缝隙连接功能调控激酶PKC、ERK1/2、p-PKC和凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3的表达;RT-PCR法检测脑组织中Cx43mRNA的变化;Elisa法检测脑组织中磷酸肌醇(inositoltrisphosphate, IP3)的变化。结果:1.神经功能评分结果显示,假手术(Sham)组无神经功能损伤;与Sham相比,缺血再灌注(ischmia/reperfusion, I/R)组神经功能评分显著增高;与I/R组相比,缺血后处理(ishemic postconditioning, IPO)组神经功能损伤显著降低;与IPO组相比,甘珀酸(Carbenoxolone, CBX)干预缺血后处理(IPO+CBX)组神经功能损伤进一步降低。结果表明,缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能具有保护作用,抑制缝隙连接后可增强缺血后处理的神经功能保护作用。2. TTC染色结果显示,Sham组未见梗死灶;与Sham组相比,I/R组脑梗死体积增大;与I/R组相比,IPO组脑梗死体积显著减小;与IPO组相比,IPO+CBX组脑梗死体积进一步减小。结果表明,IPO可缩小大鼠脑缺血再灌注损伤的脑梗死体积,抑制缝隙连接后可使脑梗死体积进一步减少。3. HE染色结果显示,Sham组组织切片结构清晰完整、细胞排列整齐,胞核居中,核膜核仁清楚;与Sham组相比,I/R组脑组织细胞排列紊乱、胞核固缩等组织形态学改变显著;与I/R组相比,IPO组细胞排列紊乱及胞核固缩等病理学改变显著改善;与IPO组相比,IPO+CBX组脑组织病理学改变进一步改善。以上结果表明,缺血后处理对缺血再灌注损伤具有保护作用,抑制缝隙连接可增加缺血后处理对缺血再灌注损伤的保护作用。4. Western blotting检测缝隙连接蛋白结果显示,与Sham组相比,I/R组Cx43蛋白表达显著增加;与I/R组相比,IPO组Cx43蛋白表达显著降低;与IPO组相比,IPO+CBX组Cx43蛋白表达进一步降低。同时,缝隙连接蛋白Cx32在各处理组中表达无显著性差异(P>0.05);缝隙连接蛋白Cx26在各处理组中表达较少。结果提示, IPO对I/R损伤的保护作用可能与Cx43蛋白表达的抑制有关。5. RT-PCR法检测Cx43mRNA结果显示,各处理组中的Cx43mRNA的表达无显著性差异(P>0.05)。结果提示,IPO抑制缝隙连接蛋白Cx43的表达可能通过转录后调控而实现的。6. Western bloting检测缝隙连接功能的激酶调控蛋白表达结果显示,与Sham组相比,I/R组PKC蛋白表达显著降低;与I/R组相比,IPO组PKC蛋白表达显著增加;与IPO组相比,IPO+CBX组PKC蛋白表达进一步增加。而p-PKC蛋白的检测结果显示,与Sham组相比,I/R组和I/R+CBX组p-PKC表达显著增加;与I/R组相比,IPO组较I/R组p-PKC蛋白表达显著降低;而IPO+CBX组较IPO组p-PKC蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。且Sham、IPO、IPO+CBX组p-PKC蛋白表达均较少。同时,缝隙连接功能调控蛋白ERK1/2在各处理组中的表达无显著性差异(P>0.05)。结果提示,PKC蛋白可能参与了IPO对I/R损伤保护作用中GJ功能的调控。7. Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达结果显示,与Sham组相比,I/R组Bax/Bcl-2表达显著增加;与I/R组相比,IPO组Bax/Bcl-2表达显著降低;与IPO组相比,IPO+CBX组Bax/Bcl-2表达进一步降低。同时,Caspase-9、Caspase-3表达与Bax/Bcl-2有类似的变化。结果提示,IPO抑制GJ功能而降低I/R损伤可能与Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3与关。8. Elisa检测IP3结果显示,与Sham组相比,I/R组IP3表达显著增加;与I/R相比,IPO组IP3表达显著降低;与IPO相比,IPO+CBX组IP3表达进一步降低。结果提示,IPO抑制GJ功能而降低I/R损伤可能与IP3有关。结论:1. IPO可通PKC抑制Cx43缝隙连接功能而减轻I/R损伤。2. IPO抑制GJ功能而降低I/R损伤可能与Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、IP3降低有关。