论文部分内容阅读
本文综合利用Bac-to-Bac和ET-Recombination的策略，通过基因敲除等方法研究vlf-1基因在杆状病毒感染周期中的生物学功能。
本文通过PCR方法扩增vlf-1基因的上下游序列，再经过克隆将抗性基因连入vlf-1基因的上下游序列之间构成敲除vlf-1基因的线形DNA同源片段。将此线形DNA同源片段电转入含AcBacmid的E.coli菌株，通过ET-Recombination技术发生同源重组，最后在含Zeocin的低盐LB平板上筛选vlf-1缺失Zeocin插入的重组BacmidpAcKO。提取pAcKODNA，将其转染昆虫细胞，以研究vlf-1的缺失对AcMNPV复制的影响。
本文用S1MNPVvlf-1拯救AcMNPVvlf-1已敲除的vAcKO-GP的重组病毒的功能，检验两者是否能作功能替换。杆状病毒复制的调控依赖于其独特的顺式作用元件hrs和非hr的DNA片段与6个复制必需基因和3个促进复制的非必需基因即反式作用因子间的相互作用。