论文部分内容阅读
目的:对构建的纯化重组亲肌肉抗原(rEg.myophilin)进行免疫保护和免疫机制的研究,为包虫病分子疫苗的研制提供新的候选分子。方法:(1)疫苗制备:重组Eg.myophlilin/pET-28a工程菌株的大量表达、纯化及疫苗制备。(2)动物分组方案:选取111只小鼠随即分为A、B对照组和实验组C组,分别对其进行皮下PBS、PBS+佐剂和PBS加佐剂加候选疫苗的注射,之后分别用同样的试剂对其对应组进行两次加强免疫;最后用1500只细粒棘球蚴的原头蚴腹腔攻击感染。(3)免疫保护力计算:(免疫保护力计算公式:减囊率=1-实验组平均包囊数/对照组平均包囊数×100%)。(4)对小鼠进行免疫保护机制的研究,①体液免疫抗体指标的测定:从领取小鼠开始按不同的时间点,分别分批次对小鼠采血,进行血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE水平的测定;②细胞免疫检测:从领取小鼠即开始按不同的时间点,分别分批次对小鼠取脾脏,并脾细胞刺激培养,监测其细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10的水平。结果:(1) rEg。myophilin能诱导小鼠产生86.11%以上的免疫保护力。(2)采集血清进行ELISA血清抗体IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE以及细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10的检测,结果表明:抗体IgG、IgG1、IgG2a以及IgE,和细胞因子IFN-γ、IL-4分别在免疫之后出现了增高,对照组IL-10在攻击感染后出现了明显的增高,而在实验组则没有相应的增高。结论:(1)rEg.myophilin为极具应用潜质的疫苗候选分子。(2)对rEg.myophilin产生的免疫保护性可能机制:①抗体介导的体液免疫,IgG及其亚类IgG1和IgE介导的体液免疫,在抗细粒棘球蚴感染过程中发挥重要作用;②细胞免疫中,细胞因子水平变化显示Th1类免疫应答在试验组免疫保护中占优势作用,有利于机体抵御细粒棘球蚴的感染;③该疫苗候选分子的注入使得免疫抑制机制得到了有效地阻遏,有利于机体的抗寄生虫。④体液免疫和细胞免疫相辅相成,相互促进,表现在:IL-4在IgE亚型类别转换中起到了关键的作用,这一机制可能直接影响着IgE参与的嗜酸性粒细胞相关的抗寄生虫感染。