论文部分内容阅读
一、研究背景和立题依据
冠心病(Coronary Heart Disease，CHD)是指冠状动脉发生粥样硬化使血管腔狭窄或阻塞，和(或)冠状动脉发生痉挛引起心肌缺血缺氧或坏死而导致的心脏疾病，是世界范围内危害人类健康的重大疾病之一。在欧洲和美国心血管疾病构成了首要死亡原因，其中冠心病分别占50％和70％。冠心病中急性冠脉综合征(Acute Coronary Syndrome，ACS)是以冠状动脉粥样硬化斑块不稳定为基本病理生理特点，以急性心肌缺血为共同特征的一组临床综合征，包括不稳定性心绞痛、非ST段抬高型心肌梗死、ST段抬高型心肌梗死。一直以来，ACS发病急，病情危重，病死率高。据统计，全球每年有1700万人死于心血管疾病，而其中一半以上死于急性心肌梗死。近十年来，我国急性心肌梗死的发病率一直在呈上升趋势，2008年我国死于急性心肌梗死患者人数在50万左右。因此，预防ACS的发生、发展，阻止病情恶化和防止复发，改善患者的生活质量，是当前从事心血管研究人员的重要责任，而寻找一种准确可靠的预测斑块不稳定的方法是重中之重。相对于影像学检查而言，血浆生物标志物检测是一种有望被临床广泛采用且经济实用的检测方法。
白介素-18(interleukin-18，IL-18)是Okamura等在1995年发现并被克隆的促炎因子和炎症标记物，在炎症反应链及先天性和后天获得性免疫疾病中起着重要的调节作用。IL-18主要由巨噬细胞产生，其cDNA编码193个氨基酸，IL-1β转化酶在N端Asp位点将其水解为有活性的IL-18，再通过与其受体构成配体-受体复合物，引起生物学效应。IL-18作为一种多效能前炎症因子和炎症标记物，其与AS发生、发展密切相关。IL-18具有潜在的临床应用价值，在ACS的发病过程中可能起到重要作用，可作为心血管疾病危险因素的评价工具。
溶血磷脂酸(1ysophosphatidic acid，LPA)作为一种细胞膜脂类衍生物，是目前已知的最小、最简单的甘油磷脂分子，系统命名为：1-脂酰-甘油-3-磷酸，其被认为是磷脂生物合成早期阶段的关键性前体，主要在血小板的活化和低密度脂蛋白轻度氧化过程中产生，其次为成纤维细胞、脂肪细胞、内皮细胞、炎症细胞等。Maolenaar首次发现由活化的血小板产生的LPA可与靶细胞表面特异性受体结合，从而影响靶细胞的功能。近年来研究发现LPA在血栓形成中具有重要作用，其对高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死和脑卒中等疾病的发生有重要意义。
基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)又称明胶酶B，是删P家族中的一个重要成员，主要由单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、泡沫细胞、成纤维细胞等合成和分泌，可特异性的与Ⅳ型胶原和明胶结合，对血管壁的基底膜和细胞外成分具有清除作用，使纤维帽崩溃影响斑块的稳定性。MMP-9不仅能促进动脉粥样硬化的发展，并且是影响AS斑块稳定性的主要因素。有研究表明，LPA能活化单核细胞和T淋巴细胞，促进其表达和分泌MMPs，而后者的表达和活化是LPA导致斑块不稳定或破裂的主要因素之一。
目前，大量基础和临床研究表明越来越多的生物标志物有助于预测ACS患者动脉粥样硬化斑块稳定性和早期识别易损斑块，但如何确立一种准确而有效的方法尚无定论。本研究选择近年来研究相对较热的三项指标IL-18、LPA和MMP-9通过ELISA法检测其血浆表达水平，以期通过联合指标判断冠状动脉斑块稳定性，从而为临床上早期发现冠心病高危病人以及为指导冠心病的治疗提供帮助。同时，我们对IL-18、LPA与MMP-9三者在ACS中的表达水平进行相关性分析，进一步明确三者之间的关系，为阐明动脉粥样硬化的机制提供研究基础。
二、研究目的
1、探讨IL-18、LPA、MMP-9三者在ACS患者血浆表达水平；
2、探讨IL-18、LPA、MMP-9三者水平与冠脉病变严重程度的关系；
3、探讨IL-18、LPA、MMP-9三者之间的相关性。
三、研究内容和方法
1.研究对象
1.1入选标准
收集2009年10月至2010年2月在中山大学孙逸仙纪念医院住院，根据临床表现、心电图、心肌损伤标志物的改变、心脏超声以及冠状动脉造影等明确诊断为CHD的患者62例，其中ACS患者52例(男24例，女28例，年龄64.2±9.4岁)，稳定型心绞痛患者10例(男6例，女4例，年龄62.1±7.7岁)。同期住院经冠脉造影证实冠脉正常者18例(男4例，女14例，年龄63.1±7.6岁)。
1.2排除标准
①、年龄大于80岁或小于18岁；
②、入院时有症状性心力衰竭表现(NYHAⅡ以上)；
③、入院时行急诊PCI或溶栓治疗
④、患严重的心肌病、心脏瓣膜疾病；
⑤、严重的肝、肾功能不全；
⑥、脑血管疾病、肿瘤、感染、自身免疫疾病；
⑦、一个月内服用抗血小板聚集药物、他汀类药物及非甾体抗炎药(可能影响LPA、MMP-9的检测结果)；
⑧、合并周围血管疾病或周围血管栓塞性疾病等。
1.3实验分组
1.3.1根据CHD的临床类型分组：稳定型心绞痛(SAP)组10例，ACS组包括：不稳定型心绞痛(UAP)组32例、急性心肌梗死(AMI)组20例。
1.3.2根据冠脉造影显示的冠脉病变支数分组：单支病变(single vessel，SV)组37例；双支病变(double vessel，DV)组15例；三支病变(triple vessel，TV)组10例。
冠脉造影显示管腔狭窄≥50％者或左冠状动脉主干直径狭窄≥50％为有意义病变，则认为该支血管为病变血管。若左前降支、左回旋支或右冠状动脉中有一支狭窄者均归为单支病变组；其中2支有病变者归为双支病变组；其中3支均有病变者归为三支病变组。对于左主干病变者，无论左前降支、回旋支或右冠状动脉有无病变，都归为三支病变组。
2.研究方法
2.1临床资料收集
详细询问病史，认真进行体格检查。将每天吸烟至少一支且持续至少一年定义为吸烟者。糖尿病者定义为既往诊断现在使用降糖药或饮食控制治疗者，或以前未治疗的患者两次空腹静脉血糖大于等于7.0mmol/L。高血压是指正在接受降压药治疗者或至少三次非同日安静状态下收缩压≥140mmHg和/或舒张压≥90mmHg。高胆固醇血症指正在接受降胆固醇药治疗者或血清总胆固醇水平≥200mg/dL。测量身高(m)、体重(kg)、血压(mmHg)，计算BMI(kg/m2)。
2.2标本采集和检测：
IL-18、MMP-9检测：安静状态下抽取肘静脉血2ml收集于EDTA抗凝管中，1h内3500rpm离心10min，取上清液约lml，保存于-80℃冰箱待检。
LPA检测：所有患者于入院隔日清晨，安静状态下抽取空腹肘静脉血4ml，置于抗凝管(北京泰福仕科技公司提供)中，3500rpm离心10min，取上清液约1ml，保存于-80℃冰箱，3个月内集中检测。LPA、MMP-9及IL-18的检测均用ELISA法完成。
所有患者于安静状态下抽取静脉血3ml于无菌干燥试管中，立即送我检验科行HDL、LDL-c、CK-MB、hs-CRP、血糖等检查。
2.3统计方法
采用SPSS16.0统计软件包进行数据处理。所有计量资料服从正态分布的用均数±标准差(x±s)表示，非正态分布的用中位数(全距)表示，正态性检测用K-S检验。多组资料间的变量不同用Kruskal-Wallis H秩和检验，两两之间比较用Bonferroni法检验。计数资料的描述用率与构成比表示，采用卡方检验。如果资料服从双变量正态分布，采用pearson直线相关分析，如果资料不服从双变量正态分布，采用Spearman秩相关分析。以双侧P＜0.05为差异有统计学意义。
四、结论
1.ACS患者血浆IL-18、LPA、MMP-9的表达水平随着心肌缺血程度的加重、冠脉病变支数的增加、冠脉狭窄程度的加重而升高，说明三者与ACS的发病密切相关。
2.ACS患者血浆的IL-18与LPA的表达水平呈强正相关性。
3.ACS患者血浆中MMP-9与IL-18、LPA表达水平之间均呈强正相关性，联合检测三者水平可作为斑块不稳定的预测指标。