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背景与目的：
本课题拟通过三个部分的研究，探讨以下几个方面的问题：1.通过对卵巢癌病例的回顾性临床分析，研究腹膜后淋巴结转移的影响因素及影响卵巢癌复发和预后的因素，进一步了解腹膜后淋巴结转移的临床意义，以及临床上治疗腹膜后淋巴结转移的效果。2.通过家犬的给药实验，测定卡铂经静脉(IV)、动脉(IA)和腹膜后(RP)给药后的血浆和腹膜后淋巴结内的卡铂浓度，检测淋巴结内淋巴细胞的凋亡情况，比较三种不同途径给药后卡铂的药代动力学参数和作用效应，为临床用药提供依据。3.探讨建立腹膜后淋巴结转移的动物模型的可行性和方法，为治疗淋巴结转移的研究提供实验动物；同时，比较静脉注射卡铂后在转移和正常淋巴结内的卡铂分布规律和作用效应，为进一步探讨不同途径给药时卡铂在腹膜后转移淋巴结内的分布和作用奠定基础。
材料与方法：
一、收集1985年1月～2003年3月中山大学肿瘤防治中心收治的1148例卵巢癌患者的临床病理资料，并通过门诊复查、电话和信件方式对患者随访至2008年9月，对患者年龄、临床分期、肿瘤病理类型、肿瘤细胞分化程度、腹膜后淋巴结手术切除方式、肿瘤细胞减灭术后手术满意度、术后化疗方案和疗程数，以及对患者腹膜后淋巴结转移、复发和生存情况等资料进行统计分析，研究卵巢癌腹膜后淋巴结转移的影响因素以及复发和预后的影响因素。
二、经IV、IA和RP途径分别注射卡铂于健康雌性家犬体内，然后于0、0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24和72小时取外周血，并在0.5、1、2、4、8、24和72hr开腹取腹膜后淋巴结，每个时点取样6个，共用家犬64只。
将外周血分离出血浆、将腹膜后淋巴结研磨离心取匀浆后，采用高效液相色谱法测定血浆和淋巴结内的游离卡铂浓度，应用梯形法和公式法计算卡铂浓度-时间曲线下面积及其他药代动力学参数，分析比较不同途径给药后的血浆和淋巴结内卡铂浓度和药代动力学参数。
采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的DUTP缺口术端标记法，对注药前和注药后1、4、8、24和72hr所取的三组腹膜后淋巴结进行淋巴细胞凋亡的检测，分析比较不同途径给药后淋巴细胞凋亡数，以及淋巴细胞凋亡数与淋巴结内卡铂浓度及AUC的关系。
三、选用38只纯种雌性新西兰健康大白兔作为实验动物“待种兔”，从荷VX2肿瘤的种兔中取新鲜肿瘤组织制成组织块悬液，注入“待种兔”的左侧腓肠肌中制备腹膜后淋巴结和胭窝淋巴结转移模型。将“待种兔”随机分为三组，分别于种瘤后第19天、第22天和第25天处死，分析比较各组的原位种植肿瘤体积、左侧(种瘤侧)腹膜后淋巴结和胭窝淋巴结转移率以及淋巴结转移与淋巴结体积的关系。
结果：
一、卵巢癌腹膜后淋巴结转移的临床意义
1.本研究中，有294例卵巢癌患者进行了腹膜后淋巴结切除或切除活检手术，盆腔淋巴结转移率和腹主动脉旁淋巴结转移率分别为35.79％和64.86％，盆腔和腹主动脉旁淋巴结同时转移者有33例，总的腹膜后淋巴结转移率为39.80％。<47岁和≥47岁患者的腹膜后淋巴结转移率分别为29.87％和50.71％。临床I期、II期、III期和IV期患者的淋巴结转移率分别为1.27％、9.30％、60.87％和82.35％。多因素分析显示，年龄和临床分期是影响腹膜后淋巴结转移的独立因素，老年和晚期患者的腹膜后淋巴结转移率较高，而病理类型、肿瘤细胞分化程度及术前CA125值与腹膜后淋巴结转移无关。
294例患者中，有腹膜后淋巴结转移和无淋巴结转移者的5年总生存率分别为23.08％和70.06％，腹膜后淋巴结切除和淋巴结切除活检患者的5年OS分别为55.92％和32.65％，但多因素分析显示，年龄、临床分期和肿瘤细胞分化程度是预后的不良因素，而腹膜后淋巴结有无转移、腹膜后淋巴结手术方式、肿瘤病理类型和术前CA125值并不影响患者的生存。
2.本研究中，有719例患者治疗后达到临床完全缓解，这些患者总的复发率为38.39％，而19.20％的复发病例出现腹膜后淋巴结转移。行腹膜后淋巴结切除、淋巴结切除活检和未切除淋巴结患者的复发率分别为33.53％、72.22％和38.79％)。<47岁和≥47岁患者的复发率分别为28.42％和50.00％。复发率随临床分期的升高而增加，I期、II期、III期和IV期患者的复发率分别为24.61％、38.89％、52.87％和73.33％。多因素分析显示，年龄和临床分期是影响患者复发的危险因素，老年和晚期患者的复发率较高，而腹膜后淋巴结手术方式、病理类型、肿瘤细胞分化程度和术前CA125值与复发无明显关系。
3.本研究1148例患者的总生存时间为1.06月～280.21月，中位生存时间为83.22月；多因素分析显示，年龄、临床分期和肿瘤细胞分化程度是影响预后的不良因素，老年患者、临床晚期和肿瘤细胞分化差的患者的生存率较低，腹膜后淋巴结手术方式、病理类型和术前CA125值则对生存无明显影响。
二、不同途径给药后卡铂在家犬血浆和腹膜后淋巴结内的分布和作用
1.卡铂经IV、IA和RP三种途径给药后在家犬体内的血浆药物浓度对数-时间曲线符合典型的二室模型。
2.卡铂经IV、IA和RP给药后在血浆中的达峰时间分别为0、0.25和0.25hr。
3.卡铂经IV、IA和RP给药后在腹膜后淋巴结内的Tmax分别为0.5、1和4hr，显著高于IV组和IA组。RP组腹膜后淋巴结的AUC0→∞也显著高于IV组和IA组。卡铂经IV、IA和RP给药后在腹膜后淋巴结的渗透率RP组显著高于IV组和IA组。
4.卡铂经IV、IA和RP给药8hr后，腹膜后淋巴结内出现的淋巴细胞凋亡数最多，分别为8.03±2.08、10.53±4.92和20.17±4.52个。RP组的平均淋巴细胞凋亡数高于IA和IV组。RP组腹膜后淋巴结内的卡铂浓度越高，淋巴细胞凋亡数越多，其相关系数为0.41。而IV与IA组腹膜后淋巴结内的卡铂浓度与淋巴细胞凋亡数无相关性。但IV、IA和RP组的腹膜后淋巴结内卡铂AUC0→∞与三组的平均淋巴细胞凋亡数呈正相关，相关系数为0.99。
三、腹膜后淋巴结转移动物模型的建立及卡铂在转移淋巴结内的分布和作用
1.兔腓肠肌部位原位种植肿瘤成瘤率为97.37％。组1、组2和组3腓肠肌原位种植肿瘤平均体积分别为24.62±5.68、41.64±7.24和57.65±11.24cm3。
2.种瘤侧总的腹膜后淋巴结转移率为83.78％，种瘤侧腹膜后淋巴结的体积随着种瘤时间的延长而增大，淋巴结体积越大，腹膜后淋巴结转移率越高，其相关系数为0.45。
3.种瘤侧总的胴窝淋巴结转移率仅为45.95％，种瘤侧胭窝淋巴结的体积随着种瘤时间的延长而增大，但胭窝淋巴结转移与胭窝淋巴结体积无相关性。
4.非种瘤侧腹膜后淋巴结和胭窝淋巴结转移率均为0。非种瘤侧胭窝淋巴结体积分别为0.13±0.04、0.19±0.04和0.31±0.11cm3。每组兔两侧腹膜后淋巴结和胭窝淋巴结的平均体积均有显著性差异。
5.原位肿瘤内的卡铂浓度在IV给药后1hr达峰，种瘤侧腹膜后转移淋巴结和非种瘤侧腹膜后淋巴结的Tmax均在IV给药后0.5hr。
6.种瘤侧腹膜后转移淋巴结内的肿瘤细胞凋亡数和非种瘤侧腹膜后淋巴结内的淋巴细胞凋亡数在IV给药后8hr时最多，种瘤侧胭窝转移淋巴结内的肿瘤细胞凋亡数和非种瘤侧胭窝淋巴结内的淋巴细胞凋亡数也在给药后8hr时最多，种瘤侧腹膜后转移淋巴结和胭窝转移淋巴结内的平均肿瘤细胞凋亡数均明显高于非种瘤侧淋巴结内的平均淋巴细胞凋亡数。
7.腹膜后转移淋巴结和胭窝转移淋巴结内的肿瘤细胞坏死率均在给药后8hr时最高。腹膜后转移淋巴结内的平均肿瘤细胞坏死率明显大于胭窝转移淋巴结。
8.种瘤侧和非种瘤侧腹膜后淋巴结和胭窝淋巴结内的卡铂浓度和AUC0→∞与平均细胞凋亡数均无相关性。转移淋巴结内的卡铂浓度和AUC0→∞与肿瘤细胞坏死率亦无相关性。
结论：
1.卵巢癌患者腹膜后淋巴结转移率随年龄的增加和临床期别的升高而增加。本研究未发现腹膜后淋巴结转移影响患者的生存，且腹膜后淋巴结手术方式与患者的复发和生存无显著相关，可能与本研究中的病例没有全部行腹膜后淋巴结切除、且手术方式不统一有关。
2.卡铂经腹膜后给药后在家犬腹膜后淋巴结内的药物浓度、AUC值和淋巴细胞凋亡数均高于动脉和静脉给药后，提示卡铂经腹膜后给药可能对腹膜后淋巴结转移有更好的作用。而卡铂经腹膜后给药后在家犬血浆的药物浓度、AUC值明显小于动脉和静脉给药后，提示卡铂经腹膜后给药进入全身循环的药量最少，毒副反应可能最轻。
3.将VX2肿瘤组织块悬液注射入兔腓肠肌中，可成功建立腹膜后淋巴结转移模型。
4.对腹膜后淋巴结转移的动物模型静脉注射卡铂后发现，腹膜后转移淋巴结内的卡铂浓度、AUC值和平均肿瘤细胞凋亡数均高于正常淋巴结内的卡铂浓度、AUC值和平均淋巴细胞凋亡数，提示静脉化疗对淋巴结转移可能也有一定的疗效。