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目的:肠梗阻是外科常见的急腹症之一。肠梗阻可导致复杂多样的病理生理变化,近年来对肠梗阻后的全身病理生理变化的研究不断提高,包括肠蠕动增加,肠腔积气积液,肠壁充血水肿,缺血缺氧、感染中毒等诸多方面,而且其也可引起肠管本身解剖与功能上的改变。随着诊疗水平不断提高,它的确诊率和死亡率都有很大程度升高和降低,但临床上对于肠梗阻特别是小儿肠梗阻如何及时、准确地做出诊断及制定出相应的治疗措施仍存在分歧,仍是临床上一个需要解决的课题。急性肠梗阻时病情的演变与肠壁受损程度密切相关,准确判断梗阻肠段的受损程度对急性肠梗阻的治疗和预后至关重要。本实验拟通过同时检测幼龄大鼠急性肠梗阻时不同时相血清中二胺氧化酶(DAO)、丙二醛(MDA)活性的改变,并结合酶组织化学和超微电镜技术观察肠壁受损时病理形态学变化,了解二者之间的关系,为临床上急性小儿肠梗阻的诊断及手术时机的选择提供一定的帮助。材料和方法:实验选用幼龄Wistar大鼠49只,体重(95±12)g,雌雄不分,由河北医科大学动物中心提供。按随机原则分为A、B、C、D、E、F、G共7组,每组7只。A组为对照组,余为实验组。实验前禁食过夜,自由饮水。用3%戊巴比妥钠腹腔注射(30mg/kg),麻醉生效后,固定于鼠台上,剪毛消毒。于下腹部正中切口入腹,B-G组均距回盲部3cm处粗丝线结扎小肠肠管,使肠内容物不能通过,不结扎肠系膜血管,关闭腹腔。A组除不结扎肠管外,其余步骤相同。对A-G组实验动物分别于手术后0h、3h、6h、12h、24h、48h、72h,取距回盲部4cm近端小肠一段(宽约1.0cm),均分成两段。4℃生理盐水漂洗,一段包埋于OCT中,行连续冰冻切片,厚度为4um,分别进行酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、还原型辅酶I四唑氮还原酶染色镜检。另一段修成1 mm3大小的组织块,于4%戊二醛4℃固定,超薄切片,透射电镜观察,并摄片记录。同时断头取血4ml,置无菌试管中,分离血清,进行DAO、MDA活性的定量测定。结果以x±s表示,对所得数据进行t检验处理,检验标准采用P<0.05有统计学意义。结果:1动物的一般情况正常幼鼠反应灵敏,性情活泼,肠管颜色鲜艳,有光泽,不扩张。随着梗阻时间的延长,幼鼠暴躁,易激惹,实验组术后24h梗阻近端肠管扩张充血,弹性下降。48h后幼鼠精神萎靡,1只死亡,近端肠管极度扩张,弹性消失,呈暗紫色,部分坏死。72h后幼鼠精神呆滞,触之无反应,4只死亡,近端肠管大部分坏死。2血清DAO活性测定结果:A组幼鼠血清DAO为0.7393±0.2978U/ml。与A比较各组均有不同程度的升高,以DEF组升高较显著,在统计学上有显著性差异(P<0.05),BCG组虽均有升高,但与A组无显著性差异。3血清MDA活性测定结果:A组幼鼠血清MDA为3.46±0.66umol/1。与A比较各组均有不同程度的升高,DEFG组升高较显著,在统计学上有显著性差异(P<0.05)。BC组虽均有升高,但与A组无显著性差异。4肠壁病理学观察结果:4.1酸性磷酸酶组化染色观察:ACP是溶酶体标志酶,ACP酶活性处出现红色无定形的沉淀。A组定位于细胞胞浆溶酶体内;B组红色均匀规则,红染区基本连续;C组绒毛损伤缺损较大,红色均匀,红染区不连续、不规则;D组绒毛结构不完整、水肿破坏,ACP溢出呈团块状;E组ACP团块状增多;F组病变加重,细胞水肿,中间为平滑肌,有团块结构,薄厚不一;G组溶体不均匀,肌层消失。4.2碱性磷酸酶组化染色观察:AKP是细胞膜标志酶,AKP酶活性处为深蓝色。A组定位于绒毛吸收细胞胞浆基底部靠近核;B组基膜不完整;C组基膜不完整缺失、断裂;D组水肿明显,平滑肌部分缺失;E组绒毛高度水肿,部分萎缩,平滑肌破坏,粘膜下增宽,细胞坏死、肿胀,酶释放,酶大量存在于绒毛间质;F组酶已完全进入间质,中间绒毛无酶;G组酶已完全脱离绒毛基膜和腺体。4.3还原型辅酶I四唑氮还原酶染色观察:NADH-TR位于线粒体中,酶活性处呈蓝紫色。A组定位于胞浆内,细胞边缘较清楚,蓝紫色;B组绒毛变宽水肿,已出现在间质;C组间质内团块出现,上皮已不完整、缺损;D组绒毛肿胀变宽、不连续;E组酶变淡,线粒体数量减少;F组绒毛结构破坏更重,颜色变浅(不可逆);G组高度水肿,着色极淡。4.4超微结构观察:A组肠粘膜上皮示单层柱状上皮,微绒毛结构完整,排列紧密整齐,粗细长短均一、无肿胀。细胞之间紧密连接完整,细胞器无明显损伤。杯状细胞分泌旺盛,分泌小泡之间隔膜清晰完整,无融合现象。B组微绒毛正常,细胞连接极其轻微变化。C组吸收细胞微绒毛接近正常,排列整齐,部分中间连接腔扩大,部分中间连接有融合现象,线粒体轻度改变。杯状细胞细胞器变化极轻微。D组吸收细胞微绒毛接近正常,中间连接稍扩大,线粒体和粗面内质网轻度变化,杯状细胞细胞器轻度变化。E组吸收细胞微绒毛数量减少,线粒体水肿,嵴数量稍减少,排列稍紊乱,部分嵴消失,膜完整,粗面内质网部分脱颗粒。间质毛细血管周围明显水肿,内含纤维细胞。F组吸收细胞表面微绒毛减少,核上区的细胞质内线粒体水肿,嵴数量减少,排列紊乱,部分嵴和膜融合消失。粗面内质网扩张呈池状,有脱颗粒现象。杯状细胞核上细胞质内较多的分泌颗粒。G组微绒毛稀疏,排列紊乱。紧密连接部分融合,中间连接部分融合消失、断裂,中间连接腔扩大,桥粒结构正常。线粒体水肿,大部分嵴和膜融合消失。粗面内质网:膜旁核糖体部分融合,部分脱落消失。杯状细胞核上胞质内的线粒体水肿,大部分嵴和膜融合或消失,粗面内质网脱颗粒现象。结论:本实验结果揭示了幼鼠急性完全性肠梗阻时血清丙二醛、二胺氧化酶的活性改变及肠壁受损的形态学的变化的关系。随着梗阻时间的延长,肠壁受损加重,细胞受损酶释放,血清DAO、MDA浓度逐渐升高,24h后DAO、MDA浓度升高不明显,48h后DAO浓度下降,可能与24小时后梗阻近端大量肠壁受损严重,肠粘膜已大部坏死,发生不可逆变化有关,根据血清DAO、MDA浓度变化可以推测肠壁的受损程度。应该在肠壁发生不可逆变化之前必须手术探查解除梗阻,所以小儿急性完全性肠梗阻在经积极非手术治疗24h～48h内病情无好转,即使病情无加重,亦应及时中转手术治疗。因此测定血清DAO、MDA的活性对临床中急性小儿肠梗阻的诊断及手术时机的选择有一定的帮助,对其进行动态观测意义更重大。本研究建立在动物实验基础之上,因此血清DAO、MDA浓度变化应用于临床作为急性小儿肠梗阻的诊断依据和选择手术时机的重要指标,尚有待于进一步研究。