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1喉癌 Hep-2细胞来源的 exosomes的发现和提取 目的：观察喉癌 Hep-2细胞可否分泌 exosomes，并从形态学角度鉴定。 方法：大量培养喉癌 Hep-2细胞，42℃热休克处理，收集细胞培养上清液，先通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清进行预处理，去除直径较大的颗粒和杂质。采用Exosome Isolation Kit（商品化试剂盒）：收集4ml已经预处理的滤过液，依次加入 Exosome Isolation Kit内试剂，通过 exosomes提取专用过滤柱，收集浓缩液。用高倍透射电子显微镜对 exosomes浓缩液鉴定。 结果：成功地从喉癌 Hep-2细胞培养上清中分离提取出 exosomes，电镜观察见exosomes呈圆形或椭圆形双层膜的囊泡状结构，直径约20-100nm，密度较高，分散均匀。 结论：首次发现喉癌细胞自身能分泌 exosomes，为喉癌免疫治疗做新的探求。 2喉癌 Hep-2细胞来源的 exosomes提取方法的比较 目的：对分离提取喉癌 Hep-2细胞来源的 exosomes两种方法对比，展现不同方法的优缺点，为选择分离提取包括喉癌 Hep-2细胞在内的肿瘤细胞来源 exosomes的方法，提供参考。 方法：大量培养喉癌 Hep-2细胞，42℃热休克处理。蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法：收集90ml培养上清液，先通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清进行预处理，去除直径较大的颗粒和杂质，再利用蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法，将上清液浓缩提纯；Exosome Isolation Kit（商品化试剂盒）：收集培养上清液4ml，依次加入 Exosome Isolation Kit内试剂，通过 exosomes提取专用过滤柱，收集浓缩液。用高倍透射电子显微镜对两法所得的 exosomes浓缩液分别鉴定，作出评价。 结果：两法均能成功地从喉癌 Hep-2细胞培养上清中分离提取出 exosomes。单个高倍视野下，蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法提取 exosomes分散性较好，但密度较低，背景见杂质较多；Exosome Isolation Kit所提取 exosomes排列紧密，密度较高，背景杂质较少。 结论：两种方法各具特点，均是较理想的 exosomes分离提取方法。利用Exosome Isolation Kit分离提取 exosomes具有样本量少、提取时间短、步骤简单、产物量大等优点，为喉癌 Hep-2来源 exosomes的分离提取，提供较好的选择。