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目的: 研究氢气水滴眼对碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的抑制作用,通过检测在氢气水干预条件下角膜及房水组织中肿瘤坏死因子α和色素上皮衍生因子PEDF的变化,探讨角膜病理性血管形成的相关机制。 方法: 1. 选取SPF级,6-8周龄,体重(180±20)g雄性SD大鼠,均将右眼作为实验眼。 2. 制作碱烧伤诱导的角膜新生血管模型,成功建立48眼,将其按随机化原则进行分组,分为阴性对照组、阳性对照组和治疗组。 3. 阴性对照组给予生理盐水滴眼,阳性对照组给予妥布霉素地塞米松眼液滴眼,治疗组给予1.6PPM(part per million) 氢气水滴眼。均为每次一滴,每日四次,持续14天。 4. 在模型建立后,采用裂隙灯显微镜分别观察第1天、第3天、第7天和第14天的角膜基本情况,拍照后使用Digimizer Image Analysis软件测量并记录新生血管长度,计算新生血管生长面积。 5. 在碱烧伤后第14天,水合氯醛腹腔麻醉,在无菌条件下取大鼠角膜组织并抽取房水。 6. 苏木精-伊红染色技术观察角膜组织病理学变化; 7. 免疫组织化学染色技术检测角膜组织色素上皮衍生因子PEDF蛋白表达。 8. 实时荧光定量PCR技术检测角膜组织色素上皮衍生因子PEDF mRNA含量。 9. 酶联免疫吸附测定技术检测房水内肿瘤坏死因子TNF-α蛋白含量。 结果: 1. 碱烧伤后第3、7天和14天,阴性对照组新生血管面积分别为(9.49±2.79)mm2、(17.71±4.06)mm2和(25.35±1.40)mm2;阳性对照组新生血管面积分别为(4.27 ±2.68)mm2、(6.44±4.67)mm2和(15.98±4.75)mm2;治疗组新生血管面积分别为(3.26±1.82)mm2、(8.59±3.98)mm2和(3.24±2.34)mm2;在第 3、7 和 14天,治疗组和阳性对照组血管面积均小于阴性对照组,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01);碱烧伤第3天,虽然治疗组新生血管面积小于阳性对照组,但相差不大,差异无统计学意义(P>0.05);碱烧伤第7天,虽然治疗组血管面积大于阳性对照组,但相差仍然较小,差异无统计学意义(P>0.05);在碱烧伤后第 14 天,治疗组血管面积明显小于阳性对照组,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。 2. 碱烧伤第14天,HE常规染色及免疫组织化学染色结果提示:治疗组角膜组织中PEDF蛋白表达较阳性对照组和阴性对照组明显增强,基质层新生血管极少; 3. 碱烧伤第14天,实时荧光定量PCR结果提示:治疗组角膜组织中PEDF mRNA 含量明显高于阳性对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.01); 4. 碱烧伤第14天,酶联免疫吸附测定结果提示:治疗组房水中TNF-α蛋白含量明显低于阳性对照组与阴性对照组,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。 结论: 采用1.6 PPM氢气水滴眼,能够通过调控肿瘤坏死因子TNF-α,上调色素上皮衍生因子PEDF在眼内的表达,继而有效抑制碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管。