【摘 要】
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目的:观察牙髓干细胞和脂肪干细胞共培养体系对细胞成骨分化的影响,并进一步探究牙髓干细胞来源的外泌体在其中发挥的作用和机制。方法:通过碱性磷酸酶染色和半定量以及PCR检测成骨相关基因的表达比较牙髓干细胞和脂肪干细胞共培养后其体外成骨能力。并利用外泌体抑制剂GW4869初步检测牙髓干细胞来源的外泌体是否在其中发挥一定的作用。通过超速离心法提取并进一步鉴定牙髓干细胞来源的外泌体后,再通过体外实验再次验证
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目的:观察牙髓干细胞和脂肪干细胞共培养体系对细胞成骨分化的影响,并进一步探究牙髓干细胞来源的外泌体在其中发挥的作用和机制。方法:通过碱性磷酸酶染色和半定量以及PCR检测成骨相关基因的表达比较牙髓干细胞和脂肪干细胞共培养后其体外成骨能力。并利用外泌体抑制剂GW4869初步检测牙髓干细胞来源的外泌体是否在其中发挥一定的作用。通过超速离心法提取并进一步鉴定牙髓干细胞来源的外泌体后,再通过体外实验再次验证其对脂肪干细胞的成骨作用。通过western blotting法和抑制试验探讨ERK、p38和JNK等分子信号通路在其中的作用。最后提取牙髓干细胞来源的外泌体单独作用于大鼠骨缺损模型,评估牙髓干细胞来源的外泌体的骨修复能力。结果:碱性磷酸酶染色和半定量以及PCR检测成骨相关基因的表达均表明牙髓干细胞和脂肪干细胞共培养比二者单独培养成骨能力要强。加入外泌体抑制剂GW4869后牙髓干细胞促进脂肪干细胞成骨分化作用减弱。进一步提取鉴定牙髓干细胞来源的外泌体后,体外验证了其对脂肪干细胞成骨分化的促进作用。ERK和JNK通路被阻断后牙髓干细胞来源的外泌体诱导的脂肪干细胞成骨分化也受到抑制,且牙髓干细胞来源的外泌体作用于脂肪干细胞后,ERK和JNK磷酸化增强。通过构建大鼠下颌骨模型,发现牙髓干细胞来源的外泌体相比于空白对照组新骨形成明显增强。结论:牙髓干细胞和脂肪干细胞共培养比二者单独培养成骨能力更强,而牙髓干细胞分泌的外泌体可以促进脂肪细胞成骨分化,外泌体可能是通过ERK和JNK途径促进脂肪干细胞成骨分化。牙髓干细胞来源的外泌体可以促进局部骨修复。
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