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研究背景：已有研究证明，人体内树突状细胞(DCs)亚群，在许多疾病包括结核病(TB)中都有不同程度的改变，但在不同分期肺结核(PTB)患者体内DCs亚群的变化有何不同尚不清楚。已有报导结核分枝杆菌对DCs的功能有抑制作用，从结核杆菌H37Ra株中提取的结核杆菌耐热性抗原(Mtb-HAg)是一种能优势诱导γδ-T细胞活化的小分子多肽，但对DCs的成熟和功能有何影响也尚未报道。 目的：研究不同分期肺结核患者外周血来源的DCs亚群即髓样树突状细胞(myeloid dendritic cells, MDC)和淋巴样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell, PDC)的变化，及Mtb-HAg在体外对人外周血单核细胞来源的DCs诱导成熟的影响。 方法： 1．DCs亚群测定方法：采集32例健康者(HD)和56例PTB患者外周静脉抗凝全血，用四色荧光抗体染色后在流式细胞仪检测和分析 DCs亚群， MDC(Lin-HLA-DR+CD11c+)，和 PDC(Line-HLA-DR+CD123+)，根据诊治情况又将PTB患者分为初治组和复治组。 2．DCs培养方法：从健康人外周血，分离获取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)后，用贴壁法获得单核细胞，加GM-CS和IL-4培养7天，再用LPS或Mtb-HAg诱导再培养2 d。 3．培养DCs的形态学观察：取培养第2 d的细胞及第9 d经Mtb-HAg诱导的DCs，用抗CD14-FITC、抗CD11c-APC染色后在荧光显微镜下观察细胞表面标志的表达。4．培养DCs的表型测定：培养的DCs用荧光抗体标记后，用流式细胞仪检测细胞表面共刺激分子CD80，CD86和HLA-DR及DCs成熟的标志CD83，以及MDC表面标志CD11c、PDC的表面标志CD123的表达。 5．混合淋巴细胞反应：CFSE标记的纯化T淋巴细胞与Mtb-HAg或LPS诱导的DCs共同培养，第9 d用流式细胞仪检测和分析T淋巴细胞增殖指数。 结果： 1. PTB患者(n=56)的PDC(0.91±0.10)％显著低于 HD组(n=32)(1.62±0.14)%(P<0.05)，MDC在PTB组、HD组之间无差异(P=0.17)，PTB患者的MDC/PDC比值也明显高于HD组(P<0.05)。 2. PTB复治组(n=25)的PDC(0.63±0.09)%明显低于初治组(n=31)(1.14±0.16)%和HD组(n=32)(1.63±0.15)%(p均<0.05)，但初治组与HD组之间无差异。而MDC在三组之间并无差异(P=0.08)。但是MDC/PDC比值在PTB复治组（5.30±1.35）明显高于初治组（3.52±0.53）和HD组（1.84±0.16）(p均<0.05）。 3.体外培养的单核细胞来源的DCs，经 Mtb-HAg诱导后，形态上为典型成熟的DCs，表现为细胞体积增大，不规则，细胞周边可见较长的毛刺状突起。用荧光显微镜观察发现，培养初期的单核细胞表达CD14，培养成熟后多为表达MDC标志CD11c。 4.外周血单核细胞经rhGM-CSF和rhIL-4培养7 d，再经Mtb-HAg诱导2 d后，单核细胞标志 CD14小于10%，高表达成熟标记 CD83(64.45%),共刺激分子CD86(76.3%) CD80(78.87%)及 HLA-DR(76.48)%，大多数细胞表达 MDC标志CD11c(74.98)%，少数表达PDC标志CD123(10.31)%。 5.用Modift软件分析CFSE标记纯化T细胞与三组DCs混合培养9 d后的细胞增殖指数（PI）发现，Mtb-HAg诱导组的PI(41.47±5.64)%明显大于阴性对照组(9.16±5.24)%，(P＜0.05)，与LPS诱导阳性对照组(34.71±6.21)%无差异。 结论： 1.与HD组相比，PTB患者DC亚群中PDC的数量明显减少，而MDC变化不明显，同时MDC/PDC的比值也明显升高。 2. PTB复治组患者PDC均明显低于初治组和HD组，MDC/PDC比值明显高于初治组和HD组，而初治组与HD组之间无明显差异；MDC在三组之间无差异；提示PDC数量与病情进展密切相关。 3. Mtb-HAg可上调外周血单核细胞来源DCs的协同刺激分子和成熟标志表达，以及增强MLR反应，提示Mtb-HAg有诱导DCs成熟和增强抗原提呈功能的作用。 4. Mtb-HAg诱导外周血单核细胞来源DCs成熟以MDC为主。