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对虾白斑综合征(WSS)是全球对虾养殖业所面临的危害最大,传播最广的病害之一,至今已席卷了整个世界的对虾养殖地区,造成了巨大的经济损失。但目前尚无良好有效的防治手段,因此早期检测和预防WSS成为近年来的研究热点。本研究主要克隆、表达了其病原对虾白斑综合征病毒(WSSV)的囊膜蛋白VP28,并用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备了单克隆抗体(单抗),同时对制备的单抗在wssv检测中的应用进行了初步探索,研究结果将为对虾自然感染WSSV状况检测和监测提供技术支撑,对了解病毒的感染与传播,进而控制该病毒的继续蔓延有重要的意义,研究内容和结果如下：1)采用改良的差速离心法从人工感染WSS的克氏原螯虾中分离纯化了WSSV。完整的病毒外包被着囊膜,长约300～400nm,直径约100～120 nm。失去囊膜剩下的核衣壳呈螺旋圆柱体形,长约300～450 nm,直径约80～90 nm。纯化的病毒形态和大小与先前报道的结果相似。2)以纯化病毒基因组为模板,通过特定引物的设计,利用PCR扩增技术,克隆得到了完整的WSSV囊膜蛋白VP28基因,把该VP28基因在大肠杆菌中进行表达并用Ni-NTA柱纯化后,分别用SDS-PAGE和Western Blot进行蛋白鉴定。结果显示表达产物均出现了与预测大小一致特异性条带,表明VP28基因成功在大肠杆菌中进行了有效表达。3)利用纯化的重组VP28蛋白作为抗原免疫Balb/c小白鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选获得阳性杂交瘤细胞,并克隆了能稳定分泌强阳性单克隆抗体的一株杂交瘤细胞株anti-rVP28 MAb。通过ELISA和免疫电镜对单抗的特异性进行了分析,结果表明所制得的单抗可以特异性地与WSSV上的VP28蛋白结合,说明用重组VP28蛋白抗原刺激筛选得到的单抗能识别天然的VP28蛋白表位,可用于WSSV的检测。4)通过Dot-blotting对WSSV进行快速的检测试验,发现anti-rVP28 MAb能有效地检测WSSV。竞争性PCR结果表明anti-rVP28 MAb检测WSSV的极限为病毒量104拷贝,这为WSSV感染的早期检测提供了可能。