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第一章小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外分离扩增及鉴定目的建立一种简单易行的小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cellsBMscs)分离培养方法，并对其表面标志进行鉴定。方法通过全骨髓贴壁分离法体外分离、扩增小鼠BMSCs。观察原代及传代小鼠BMSCs形态变化，对第3代小鼠BMSCs表面抗原CD34、CD45、CDl05和CDl06进行流式细胞仪检测，并对小鼠BMscs进行纯度测定。结果用此法进行小鼠BMscs的原代接种培养24 h后可见大量悬浮细胞，少许贴壁细胞，呈小圆形；72h后贴壁细胞逐渐增多，培养至第7d细胞伸展成长梭形，呈集落生长。经反复换液后未贴壁的造血细胞被弃去。BMscs在培养的2～6d细胞增殖较慢，7～10d细胞增殖较快。细胞培养约10—12d左右，可接近75％～80％融合。传代后的小鼠BMscs 24b基本全部贴壁，细胞形态较为均一，呈均匀性分布生长。分离纯化后所得细胞活力为92.6±1.8％。流式细胞术结果显示第3代小鼠BMscs细胞均一性较好，在90%以上。CD34、CD45表达阴性，cDl05、cDl06表达阳性。结论采用全骨髓贴壁分离法可获得：BMscs，这种方法简单、便捷、实用。所得小鼠BMscs活力及纯度均较高，流式细胞技术可以鉴定体外分离培养的小鼠BMscs。第二章TGF-β1表达载体的构建及其在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达目的将transforming growth factor beta 1(TGF-β1)序列构建到带GFP的表达载体pcDHl-Mcsl-EFl-copGFP中，并将重组质粒转染入BMscs，使其在BMsc8中表达。方法以小鼠肺组织cDNA为模板，PcR扩增出TGF-β1基因，并将其插入pcDHl-Mcsl-EFl-copGFP载体质粒中，转化至感受态菌DH5a，抽提质粒，经PcR扩增和测序鉴定后转染入BMscs细胞，利用激光共聚焦显微镜和Real-time PCR方法对其表达位置和表达量进行检测。结果经PcR及测序鉴定，构建入载体质粒的基因为TGF-β1基因，pcDHl-TGFβ1-EFl-copGFP重组质粒成功构建，且它能在BMSCs细胞中成功表达。结论TGF-β1基因在BMSCs细胞成功表达，为进一步研究TGFβ1影响BMSCs细胞的生理功能奠定了实验和理论基础。