【摘 要】
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由于肠道乳糖酶的缺乏,多数亚洲及非洲成年人患有乳糖不耐症(lactose intolerance),即食用乳品后不能消化吸收其中的乳糖,甚至产生腹胀,腹痛及腹泻等症状.中国更是有高达85％以
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由于肠道乳糖酶的缺乏,多数亚洲及非洲成年人患有乳糖不耐症(lactose intolerance),即食用乳品后不能消化吸收其中的乳糖,甚至产生腹胀,腹痛及腹泻等症状.中国更是有高达85％以上的成年人为乳糖不耐症患者,其解决途径主要是服用外源性乳糖酶替补治疗,国外目前已有相关产品出售.而中国目前尚未见有同类产品.这迫使我们加强药用乳糖酶的研究.国家药品生物制品检定所生化药品室培育了SDA许可的Kluyeromyces Marxianus乳糖酶高产菌株.该文对该Kluyeromyces Marxianus菌株的培养条件及其乳糖酶的纯化和性质进行了研究.用正交实验法和逐步优化法摇瓶培养KluyeromycesMarxianus得到了适宜的培养条件:培养基乳糖8％,尿素0.375％,酵母抽提物0.35％,1.5％KH<,2>PO<,4>,0.01％Nacl,0.01％Mncl<,2,>,初始pH 7.5,2.5％的接种量,30℃培养20小时基于摇瓶培养的条件,用5L发酵罐培养,采用调节pH和补料的方法,乳糖酶产量为122.6U/mL发酵液.菌体经超声波破碎、硫酸铵沉淀,经HitrapQ离子交换层析pH7.5,20mM的磷酸缓冲液平衡,控制流速为5ml/min然后pH7.5的20mmol/L的磷酸缓冲液,0-1mol/L的NaCl梯度洗脱;基本得到了电泳纯的乳糖酶,比活达776.77u/mg.纯化倍数26.8,回收率54.82％性质研究表明酶作用的最适温度为37℃,最适pH为6.0-7.0之间.该酶在45℃以上失活较快.该酶以乳糖为底物时的Km为:14.22mM.Mn<2+>,Mg<2+>,Ca<2+>,K<+>,Co<2+>对乳糖酶都有一定程度的激活作用,而K<+>对乳糖酶有较强的激活作用.Zn<2+>,Cu<2+>,Fe<2+>,Ag<+>离子对乳糖酶有相当的抑制作用.PCMB和NBS可以使酶失活.酶的正常水解产物半乳糖对酶活力也有一定的抑制作用.
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