论文部分内容阅读
本研究利用屠宰场牛卵巢获取卵泡卵母细胞，通过在改良的基础培养液中添加透明质酸（HA），进行体外培养（IVM）—体外受精（IVF）－早期胚胎体外培养（IVC）－体外受精胚的冷冻保存（FC）等系列了研究，探讨 HA 对牛卵母细胞成熟、早期胚胎发育以及培养胚胎抗冻性的影响，结果如下： 1、当 mTCM-199 中 HA 浓度为 4.0 mg/mL 时，第一极体排出率和卵裂率显著高于其他各组（P<0.05），初步表明 4.0 mg/mL 是无血清培养中 HA 的最佳浓度。 2、当在 TCM-199 中添加 HA、BSA和 OCS 时，OCS 组的第一极体排出率显著高于其他两组（P<0.05），分别为 83.40%、84.33%和 92.17%，但卵裂率三者差异均不显著（P＞0.05）；HA 与 BSA组第一极体排出率差异不显著（P＞0.05）；表明在无血清培养中 HA 可代替 BSA，但是培养的效果不如血清。 3、HA 在 TCM-199 和 SOF 基础培养基中，对卵母细胞的第一极体排出率和卵裂率无明显差异（P＞0.05）。表明在无血清培养下，HA 在复杂和简单的培养液中都支持卵母细胞的成熟。 4、HA 浓度对牛早期体外胚胎发育具有重要的影响。在 mTCM-199 中，单独添加与不添加 HA 囊胚发育率差异显著（P＜0.05）；HA 浓度为 2~4 g/L 时，囊胚发育率最高达 31.76%；初步认为 2~4 g/L 是 HA 在无血清培养牛体外胚胎发育的较佳浓度。 5、在 mTCM-199 中，HA 与不同添加物对早期胚胎发育的影响比较中发现，HA 组囊胚发育率高于 PVA 组，并与之差异显著（P＜0.05），分别为 31.54%与 26.61%；但低于 FCS 组和 BSA组，与 FCS 组差异显著（P＜0.05），与 BSA组差异不显著（P＞0.05），表明 HA 对牛早期体外胚胎的发育效果优于 PVA；但不及 FCS 发育效果好，是 BSA和血清的较佳替代物。 6、在 HA 无血清培养下，卵母细胞的成熟情况是影响早期胚胎的发育因素之一，HA 组卵母细胞形成的胚胎囊胚发育率高于 PVA 组，并且与之差异显著（P＜0.05），分别为 32.35%与 26.80%；但显著低于 ECS 组（P＜0.05），分别为 32.35%与 34.91%；高于 BSA组，但与之差异不显著（P＞0.05）。 7、SOF组囊胚发育率高于TCM-199组，但与之差异不显著（P＞0.05），分别为31.03%与 30.43%；表明 HA 在 TCM-199 和 SOF 液都支持早期胚胎体外发育。 8、TCM-199+HA 组胚胎冷冻解冻后，存活率和孵化率均高于未添加 HA 组，并且与之差异显著（P<0.05），存活率和孵化率分别为 65.85% vs 58.69%和 60.98% vs 36.96%。 9、SOF+HA 组胚胎冷冻解冻后，存活率和孵化率均高于未添加 HA 组，并且与之差异显著（P<0.05），存活率和孵化率分别为 58.33% vs 43.14%和 52.08 vs 31.37%。 10、TCM-199+HA 组胚胎冷冻解冻后，存活率和孵化率均显著高于 SOF+HA 组（P<0.05）。