论文部分内容阅读
目的本研究通过对《内经》地域养生思想的归纳总结,阐释地域的差异对人类的体质、疾病、治疗、寿命长短以及气候的形成等方面有着直接的影响,为人们改良生活方式、提高环境健康、运用道地药材提供依据。本实验遵循《内经》地域养生思想理论指导,建立模式生物四膜虫中药筛选平台,采用恩施道地药材——竹节参中的有效成分竹节参总皂苷(TSPJ,Total Saponins of Panax japonicus)直接干预模式生物的方法,观察药物对模式生物的抗氧化作用等实验研究,初步探讨中药有效成分干预模式生物抗氧化机制。方法主要采用药物直接添加入培养基的方法干预四膜虫,观察中药材水提液直接添加对四膜虫寿命的影响。将嗜热四膜虫在无菌培养液的24孔板中加入配制好的16mg/ml竹节参总皂苷(TSPJ)溶液,接种适量对数生长期的嗜热四膜虫培养液,每个浓度分3个平行,另设空白对照,30℃培养。分别在不同温育时间取样计数,得出最佳浓度。之后使用超声处理机(φ2)破碎细胞,将四膜虫裂解之后的液体以12000r.min-1离心20min,取上清液。用紫外分光光度计测定超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性。运用Q-PCR测定GPX-4、TXNRD2基因mRNA表达,每个标本均进行GPX-4mRNA、TXNRD2mRNA和内参18s基因的荧光定量PCR。根据NCBI、TGD中四膜虫GPX-4mRNA、TXNRD2mRNA和内参18s基因序列行引物设计。结果1.四膜虫超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的测定超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内极为重要的抗氧化酶,对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。本实验分析了竹节参总皂苷(TSPJ)对嗜热四膜虫细胞SOD酶活性的影响。结果表明,嗜热四膜虫细胞T-SOD的活性随着ρ(TSPJ)的增加而增加(P<0.01)。2.不同浓度的竹节参总皂苷对GPx-4mRNA、 TXNRD2mRNA的影响GPx-4mRNA、 TXNRD2mRNA基因在各组均有表达,经过低浓度和高浓度药物干预后,与空白组比较,嗜热四膜虫的GPx-4mRNA、 TXNRD2mRNA表达均显著升高,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)结论1、地域环境因素的差异直接影响着人类的体质、疾病、治疗、寿命长短以及气候的形成等方面;顺应《内经》地域养生思想不仅可以有效地提高人类躯体健康,制定最符合个体的健康生活方式,而且对于环境健康的提高也有着十分重要的意义。2、恩施道地中药——竹节参中的主要成分竹节参总皂苷具有明显抗氧化延缓衰老的功效,作用机制可能与提高T-SOD活性,使抗氧化基因GPX-4、TXNRD2表达上调有关。