《内经》地域养生思想探讨及恩施道地中药材对模式生物四膜虫的抗氧化作用研究

来源 :湖北中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ayun2009
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目的本研究通过对《内经》地域养生思想的归纳总结,阐释地域的差异对人类的体质、疾病、治疗、寿命长短以及气候的形成等方面有着直接的影响,为人们改良生活方式、提高环境健康、运用道地药材提供依据。本实验遵循《内经》地域养生思想理论指导,建立模式生物四膜虫中药筛选平台,采用恩施道地药材——竹节参中的有效成分竹节参总皂苷(TSPJ,Total Saponins of Panax japonicus)直接干预模式生物的方法,观察药物对模式生物的抗氧化作用等实验研究,初步探讨中药有效成分干预模式生物抗氧化机制。方法主要采用药物直接添加入培养基的方法干预四膜虫,观察中药材水提液直接添加对四膜虫寿命的影响。将嗜热四膜虫在无菌培养液的24孔板中加入配制好的16mg/ml竹节参总皂苷(TSPJ)溶液,接种适量对数生长期的嗜热四膜虫培养液,每个浓度分3个平行,另设空白对照,30℃培养。分别在不同温育时间取样计数,得出最佳浓度。之后使用超声处理机(φ2)破碎细胞,将四膜虫裂解之后的液体以12000r.min-1离心20min,取上清液。用紫外分光光度计测定超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性。运用Q-PCR测定GPX-4、TXNRD2基因mRNA表达,每个标本均进行GPX-4mRNA、TXNRD2mRNA和内参18s基因的荧光定量PCR。根据NCBI、TGD中四膜虫GPX-4mRNA、TXNRD2mRNA和内参18s基因序列行引物设计。结果1.四膜虫超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的测定超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内极为重要的抗氧化酶,对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。本实验分析了竹节参总皂苷(TSPJ)对嗜热四膜虫细胞SOD酶活性的影响。结果表明,嗜热四膜虫细胞T-SOD的活性随着ρ(TSPJ)的增加而增加(P<0.01)。2.不同浓度的竹节参总皂苷对GPx-4mRNA、 TXNRD2mRNA的影响GPx-4mRNA、 TXNRD2mRNA基因在各组均有表达,经过低浓度和高浓度药物干预后,与空白组比较,嗜热四膜虫的GPx-4mRNA、 TXNRD2mRNA表达均显著升高,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)结论1、地域环境因素的差异直接影响着人类的体质、疾病、治疗、寿命长短以及气候的形成等方面;顺应《内经》地域养生思想不仅可以有效地提高人类躯体健康,制定最符合个体的健康生活方式,而且对于环境健康的提高也有着十分重要的意义。2、恩施道地中药——竹节参中的主要成分竹节参总皂苷具有明显抗氧化延缓衰老的功效,作用机制可能与提高T-SOD活性,使抗氧化基因GPX-4、TXNRD2表达上调有关。
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