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细胞色素P450(Cytochrome P450，CYP450)是人体内外源化合物代谢的最重要的酶，参与催化多种生物转化反应，其中大多数是氧化反应，负责药物的代谢，致癌物及有毒化合物的清除等。CYP2C19,CYP2D6作为细胞色素P450家族的重要成员，其基因多态性是导致个体、种族间的药物代谢差异和药物不良反应的决定因素。其中CYP2C19*2和CYP2C19*3是可以解释99％的东方人的遗传多态性的弱代谢者的等位基因。因此研究二者基因遗传多态性在预测对某一治疗药物的副作用或疗效不足以及进行个体化用药方面有着非常重要的临床意义。
本研究中，我们首先以2008年在中国四个地区的400名汉族人群中大规模测序时新发现的CYP2C19 T302R(cDNA∶905C＞G)和CYP2D6_R441H(gDNA∶4045T＞C)这两个突变位点作为研究对象，利用体外重组技术，克隆及表达CYP2C19和CYP2D6的两个单核苷酸突变株，分析了突变对酶活性的影响。其次，用传统的PCR-RFLP方法对在中国人中突变率最高的CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因进行分析，统计了74例样本的基因突变率，对于携带此类突变的人群在服用主要经CYP2C19代谢的药物时减少药物不良反应具有指导意义。
为了研究这两个SNPs对酶活性的影响，我们在已有的CYP2D6和CYP2C19野生型质粒模板上采用基于PCR的定点突变法引入两个新的突变位点，构建了CYP2C19_T302R和CYP2D6_R441H的cDNA。并将其与酵母表达载体pYES2/CT连接，分别电转入酿酒酵母细胞ycy107中，利用半乳糖诱导目的蛋白表达，通过差速离心法制备酵母微粒体，经Westem blot鉴定与预期大小相同，说明目的蛋白能够表达。并用荧光底物CEC和底物S-美芬托英对CYP2C19 T302R进行酶活性分析，用荧光底物AMMC和底物丁呋洛尔对CYP2D6 R441H进行酶活性分析。
结果：荧光底物检测法和HPLC特异性底物检测法都证明突变株T302R和R441H都完全失活。表明氨基酸改变后，酶活性与野生型有显著差异。用传统的PCR-RFLP方法对74例样本进行CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因分型，基因突变率CYP2C19*2为30.4％，而CYP2C19*3为6.8％，和以往文献中报道的中国汉族人CYP2C19*2和CYP2C19*3基因突变率相符。