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目的：研究Yes相关蛋白(Yes-Associated Protein, YAP)在肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma Cell, HCC)中的表达对多柔比星耐药的影响；初步探讨肝癌中YAP过表达参与耐药性相关的促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinase, MAPK)信号通路活化的机制。方法：使用质粒转染的方法在肝癌细胞株中过表达YAP,以蛋白免疫印迹法(Western Blot, WB)检测肝癌细胞中YAP的表达水平；应用四甲基偶氮唑盐染色法(Methyl Thiazolyl Tetrazolium, MTT)法检测过表达YAP的肝癌细胞和对照细胞在暴露于多柔比星后细胞活力的改变,并行统计学分析；使用RNA干扰(RNA interferience, RNAi)抑制肝癌细胞中内源性YAP表达,应用WB方法检测肝癌细胞株中YAP的表达水平；MTT法检测YAP RNAi转染的肝癌细胞暴露于多柔比星后细胞活力的改变,并行统计学分析；末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP Nick End Labeling, TUNEL)法检测YAP RNAi转染的肝癌细胞暴露于多柔比星后细胞凋亡的改变；用WB、半定量WB检测过表达和低表达YAP的肝癌细胞中YAP和凋亡相关蛋白cleaved PARP、Bcl-xL、Bax的表达水平,以及MAPK信号通路、Akt信号通路的活化情况；用MAPK信号通路和Akt信号通路特异性抑制剂处理相应的肝癌细胞,检测凋亡相关蛋白表达水平的改变,用MTT法检测细胞活力的改变,并行统计学分析。结果：与空白载体转染的对照细胞相比,过表达YAP的Huh7和Hep3B经多柔比星处理48和72小时后,细胞活力显著较高,其半数最大抑制浓度(Half maximal Inhibitory Concentration, IC50)在对照组细胞中为0.83μg/ml和1.14μg/ml,在过表达YAP的Huh7细胞中为1.02μg/ml,过表达YAP的Hep3B中为1.73μg/ml。RNAi瞬时转染Huh7和PLC/PRF/5细胞后,内源性YAP的表达水平在转染后1-3天显著下降。MTT实验显示不同浓度的多柔比星处理RNAi转染后的肝癌细胞,其细胞活力显著降低。TUNEL实验显示低表达YAP的肝癌细胞在多柔比星中凋亡细胞数量显著增加。WB显示：与对照细胞相比,过表达YAP的肝癌细胞经多柔比星处理后,凋亡相关蛋白cleaved PARP和Bax水平显著降低,而Bcl-xL水平显著升高,细胞内MAPK和Akt信号通路均显著活化,而RNAi抑制YAP的肝癌细胞株中各凋亡相关蛋白表达水平和信号通路活化水平呈相反趋势的改变。在过表达YAP的肝癌细胞中分别使用MAPK或Akt特异性抑制剂LY294002、U0126抑制相应信号通路活化后,再用多柔比星处理这些细胞,MTT实验显示仅U0126可显著降低过表达YAP细胞的活力,WB实验显示仅U0126可降低细胞内Bcl-xL表达水平、上调cleaved PARP和Bax的表达水平。结论：1.YAP过表达可抑制多柔比星对肝癌细胞的抑制作用,是肝癌细胞对多柔比星的耐药的机制之一；2.抑制肝癌细胞内源性YAP的表达,可以逆转多柔比星耐药并促进肝癌细胞凋亡；3. MAPK信号通路活化与YAP介导的肝癌细胞多柔比星耐药相关,抑制该信号通路活化可部分抑制YAP介导的多柔比星耐药。