论文部分内容阅读
目的:心房纤维化是心房颤动(房颤)维持的基质,并且可以作为预测患者射频消融术后复发的一项重要指标。循环纤维细胞作为一类来源于骨髓,具备有分化为成纤维细胞能力的一类特殊的白细胞亚群,参与了多种纤维化疾病的发展。本实验旨在研究循环纤维细胞是否参与了持续性房颤诱导的心房纤维化及其潜在的调控机制。方法:本实验随机入选56例在我院首次接受CARTO三维标测系统引导下射频消融术的非瓣膜性房颤患者,包括40例持续性房颤患者(发病时间>6个月)和16例阵发性房颤患者,同时纳入28例正常人作为对照组。我们采集了包括性别、年龄、收缩压、舒张压、血脂分析、血常规、凝血功能、静息心率、心超以及相关药物使用史等资料。我们分别从对照人群和房颤患者采集20 ml静脉血,使用流式细胞仪检测外周血中循环纤维细胞(CD34和Collagen I双阳性)的百分比。同时,我们将剩余静脉血中的白细胞进行12天的体外培养,观察到循环纤维细胞从悬浮圆形细胞逐渐转变成梭形样贴壁细胞。12天后我们通过流式细胞分选仪从所有贴壁细胞中纯化出循环纤维细胞(CD45和Collagen I双阳性)。我们利用CARTO电压标测系统对部分房颤患者左心房进行了电压标测,根据心房低电压分布区域评估其纤维化面积,并与循环纤维细胞百分比进行相关性分析。在此基础上我们对射频消融术后患者进行短期随访。利用实时荧光定量PCR技术检测了纤维连接蛋白(fibronectin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),I型胶原蛋白(collagen I)的m RNA表达水平;采用免疫荧光技术检测α-SMA在培养后的循环纤维细胞中的表达量。结果:1)持续性房颤组外周血中循环纤维细胞占白细胞数比例显著高于阵发性房颤组和对照组(3.3±1.3%vs.2.5±0.8%,2.0±0.8%,P<0.05);2)外周血白细胞培养12天后,持续性房颤患者组循环纤维细胞数占贴壁细胞数比例高于对照组(66±10.1%vs.48±7.9%,P<0.01)和阵发性房颤组(66±10.1%vs.57±7.9%,P<0.01),阵发性房颤组和对照组之间也存在明显差异(57±7.9%vs.48±7.9%,P<0.01),该结果提示房颤患者外周血白细胞具备更强的向循环纤维细胞转化的能力;3)电压标测结果显示,21例持续性房颤患者左心房均存在不同程度心肌纤维化,并且纤维化程度与外周血中循环纤维细胞百分比之间存在显著线性正相关性(R=0.7167,P<0.001);4)射频术后随访1个月结果显示,循环纤维细胞比例较高组(>3.1%)的术后复发率显著高于循环纤维细胞比例低组(≤3.1%)(56%vs.20%);5)房颤患者的循环纤维细胞与对照组的循环纤维细胞在表型存在显著的差异,表现为fibronectin、α-SMA、collagen I、趋化因子受体CX3CR1在持续性房颤组的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:房颤触发骨髓来源的循环纤维细胞的增殖和迁移,同时增强循环纤维细胞向(肌)成纤维细胞转分化的能力,最终加重了心房纤维化的进程。外周血中循环纤维细胞比例可作为评估持续性房颤患者左心房纤维化程度和射频术后复发率的一项重要指标。