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目的：研究汉防己甲素(Tet)与γ射线对人食管癌细胞株Eca-109的放射增敏作用,并探讨其放射增敏的机制。
方法：采用MTT法测定不同浓度Tet(10-60μM)作用于人食管癌细胞株Eca-10948h和72h的抑制率；克隆形成分析法测定Tet对单纯照射组(γ射线吸收剂量分别为:0、2、4、6、8、10Gy)和照射+Tet组(与单纯照射组同时同等剂量照射后后加人2μM Tet)各组人食管癌细胞株Eca-109的放射敏感性的影响；流式细胞术分析空白对照组(不照射、不加药)、照射组(4Gy)、照射+Tet组(4Gy+0.2μM Tet、4Gy+2μM Tet)、Tet组(2μM Tet)各组照射后细胞周期的再分布；Western Blotting分析空白对照组(不照射、不加药)、照射组(4Gy)、照射+Tet组(4Gy+0.2μM Tet、4Gy+2μM Tet)、Tet组(2μM Tet)各组细胞周期相关蛋白的表达；分裂指数法分析Tet对空白对照组(不照射、不加药)、照射组(4Gy)、照射+Tet组(4Gy+2μM Tet)三组细胞照射后细胞分裂的影响。
结果： MTT结果显示,Eca-109细胞经不同浓度(10-60μM)Tet处理48h和72h,对细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖性。在Eca-109细胞中,两组细胞在不同剂量照射下克隆形成率分别为:γ射线组(0-10Gy):(100±0.25)％、(90.61±1.34)％、(66.34±1.43)％、(51.0±1.35)％、(28.83±0.81)％、(10.28±1.60)％；γ射线+Tet2μM组(0-10Gy):(99.6±0.30)％、(89.28±1.33)％、(55.50±1.25)％、(48.72+.094)％、(10.58±1.12)％、(10.58±1.12)％、(10.28±1.60)％、(5.83±0.97)％,结果显示随着γ射线剂量的增加,细胞克隆形成率逐渐降低。与其它照射剂量相比,从4Gy照射后,γ射线组和γ射线+Tet2μM组这两组克隆形成率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结果表明,Tet能显著增加γ射线的杀伤作用,其增敏比为1.43。γ射线照射后,Eca-109细胞各组G2／M期细胞数分别为:对照组(14.86±0.74)％、Tet2μM组(08.09±1.42)％、4Gyγ射线组(20.58±0.83)％、4Gyγ射线+0.2μM组(19.66±1.15)％、4Gyγ射线+2μM组(18.08±0.72)％。4Gyγ射线+0.2μM组与γ射线4Gy比较,差异有统计学意义(P<0.05),4Gyγ射线+2μM组与4Gyγ射线组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结果表明,细胞明显阻滞于G2期,而Tet可以降低这种阻滞。Western bloting实验结果显示,Eca-109细胞受4Gyγ射线照射后,CyclinB1的蛋白表达水平明显降低,在加入Tet后,CyclinB1、Cdc2的蛋白表达明显增加,其中尤以2μ M时最为显著。CyclinB1各组蛋白表达水平分别为:对照组(0.8820±0.0260)、Tet2μ M组(1.2915±0.0479)、4Gyγ射线组(0.8031±0.0307)、4Gyγ射线+0.2μ M组(0.9362±0.0190)、4Gyγ射线+2μM组(1.0937±0.1047),4Gyγ射线+2μ M组与4Gyγ射线组比较,差异有统计学意义(P<0.01)；Cdc2各组蛋白表达水平分别为:对照组(0.1355±0.0050)、Tet2μ M组(0.1949±0.0049)、4Gyγ射线组(0.1915±0.0122)、4Gyγ射线+0.2μ M组(0.2203±0.0137)、γ射线4Gy+2μ M组(0.2577±0.0112),4Gyγ射线+2μ M组与4Gyγ射线组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Tet诱导各组细胞分裂指数:对照组(5.58±0.52)％、4Gyγ射线照射组(2.78±0.28)％、4Gyγ射线照射+Tet2μM组(13.94±0.47)％,三组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结果显示照射后细胞分裂指数明显降低,说明CyelinB1／Cdc2复合物受到抑制,而在使用Tet后,其分裂指数又明显上升,表明Tet可以逆转γ射线对Cyclin B1与Cdc2蛋白的表达的抑制作用,从而促使阻滞于G2期的Eca-109细胞进人M期。
结论： Tet对人食管癌Eca-109细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量-时间依赖性；Tet能显著增加γ射线对人食管癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能与Tet去除放射引起的G2期阻滞有关。