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目的:建立体外培养扩增C57BL/6小鼠树突状细胞(dendritic cell ,DC )的方法;应用反复冻融法制备小鼠红白血病FBL-3肿瘤细胞抗原并致敏DC;观察致敏DC培养上清对小鼠红白血病细胞FBL-3的诱导分化作用;观察IL-12单克隆抗体阻断致敏DC培养上清对小鼠红白血病细胞FBL-3的诱导分化作用;进而探讨DC培养上清诱导白血病细胞分化作用的机制,为白血病的诱导分化治疗提供一条新的途径。方法:①应用1ng/ml白介素-4(interleukin , IL-4)和10ng/ml粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor ,GM-CSF)联合诱导培养C57BL/6小鼠骨髓细胞,光镜和电镜观察DC发育过程中形态学变化;流式细胞术检测DC表面分子CD80、CD86、H-2Kb及I-Ab的表达情况;②常规培养并收集C57BL/6小鼠诱导的红白血病FBL-3细胞,反复冻融FBL-3细胞制备肿瘤抗原,收集备用;③制备的FBL-3肿瘤抗原与培养的C57BL/6小鼠DC共孵育,致敏DC;④用ELISA法检测致敏DC第8天培养上清中IL-12的浓度(细胞浓度2.0×106/ml);⑤分四组:标准IL-12组(阳性对照组,A组),致敏DC第8天的培养上清组(致敏DC组,B组),加入IL-12单克隆抗体的致敏DC第8天的培养上清组(阻断实验组,C组),RPMI-1640组(阴性对照组,D组)。四组分别与FBL-3细胞共孵育72小时后,用瑞氏染色计数成熟单核细胞、透射电镜观察成熟细胞的超微结构、流式细胞仪检测细胞表面CD14分子的阳性表达率,观察四组有何不同。结果:①用IL-4和GM-CSF联合培养C57BL/6小鼠骨髓细胞,可得到符合DC特征的典型细胞;②ELISA法检测致敏DC培养第8天DC(细胞浓度2.0×106/ml)上清中IL-12的浓度为:(699.77±16.67)pg/ml;③瑞氏染色计数成熟单核细胞的比率:阴性对照组转化率为(3.06±1.41)%,阻断实验组单核细胞比率为(17.11±1.25)%,两者比较P<0.05;致敏DC组单核细胞比率为(46.03±2.41)%,与阴性对照组和阻断实验组比较P均<0.05;阳性对照组单核细胞比率(48.07±1.96)%,与阴性对照组和阻断实验组比较P均<0.05,与致敏DC组比较P>0.05;④透射电镜计数成熟单核细胞的比率与瑞氏染色计数成熟单核细胞的比率基本相同;⑤流式细胞仪分析显示:阴性对照组细胞基本无CD14表达,表达率为(3.24±1.39)%;阳性对照组、致敏DC组、阻断试验组作用后均有部分细胞表达CD14分子,CD14阳性率分别为(49.39±1.88) %、(48.28±1.10) %、(18.02±0.92) %。致敏DC组和阳性对照组比较P>0.05;致敏DC组、阳性对照组分别与阴性对照组、阻断试验组比较P<0.05;阻断试验组与阴性对照组比较P<0.05。结论:①应用IL-4联合GM-CSF培养小鼠骨髓细胞,可大量扩增成熟DC,培养的DC符合其自身的特性;②致敏DC可分泌大量的IL-12;③致敏DC培养上清能诱导FBL-3细胞部分转化为单核细胞,转化后的单核细胞符合其自身的特性;④IL-12单克隆抗体能够阻断致敏DC培养上清对FBL-3细胞的诱导转化作用;⑤致敏DC培养上清中可能还存在其它物质对FBL-3有诱导分化作用。