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目的:研究葛根素对肝脏缺血再灌注损伤的防治作用及作用机制。
方法:1.实验分组:健康日本大耳白兔30只,随机分为3组,每组10只。(1)对照组(C组),仅行麻醉、开腹和游离肝叶等操作,不阻断肝血流。(2)缺血再灌注组(IR组),行肝门阻断,缺血45分钟后再灌注45分钟。(3)葛根素组(Pur组):缺血45分钟后再灌注45分钟,于缺血前10分钟静脉给予葛根素注射液(30mg/kg)。C组和IR各组则静脉给予等量生理盐水。余同IR组。
2.采用Pringle氏法建立肝脏缺血再灌注模型。
3.取颈外静脉血比较3组大白兔缺血前10分钟、缺血45分钟和再灌注45分钟时ALT、SOD、GSH-Px、XO、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO、ET、TXB2、PGF1。及Ptmax、PtT、PtS。再灌注45分钟时取肝左叶组织测定SOD、GSH-Px、XO、MDA、TXB2、PGF1α、ET、NO、ATP、ADP、AMP、EC、TAN,并在光镜、电镜下观察肝组织形态学结构变化。
结果:1.C组术前、缺血后45分钟及再灌注后45分钟血浆ALT浓度无明显差异。IR组血浆ALT浓度在肝脏缺血45分钟明显升高,再灌注45分钟后进一步升高(P<0.01)。Pur组肝脏缺血45分钟后血浆ALT浓度略有升高,但再灌注45分钟血浆ALT浓度显著低于IR组同期(P<0.01)。
2.IR组血浆SOD、GSH-Px活力在肝脏缺血45分钟以及再灌注45分钟逐步降低,XO活力、MDA含量明显升高。Pur组血浆SOD、GSH-Px活力无明显下降,XO活力、MDA含量无明显升高,尤其再灌注45分钟血浆SOD活力显著高于与IR组同期(P<0.01),XO活力、MDA含量显著低于IR组同期水平(P<0.01).
3.IR组肝组织ATP、EC含量明显低于C组(P<0.01),ADP、AMP含量显著高于C组(P<0.01),两组TAN无显著性差异(P>0.05)。Pur组ATP、EC含量均明显高于IR组(P<0.01),ADP、AMP含量显著低于IR组(P<0.05或P<0.01),ATP仍低于C组(P<0.05),TAN在两组间无显著性差异(P>0.05)。
4.IR组血浆TNF-α、IL-1β、IL-6浓度在肝脏缺血45分钟及再灌注45分钟逐渐升高(P<0.01)。Pur组肝脏缺血45分钟血浆TNF-α,IL-1β,IL-6浓度略有升高,但再灌注45分钟血浆IL-1β、IL-6浓度反而有所下降,血浆TNF-α,IL-1β,IL-6浓度均显著低于与IR组同期水平(P<0.01或P<0.05)。
5.IR组血浆ET浓度在肝脏缺血45分钟及再灌注45分钟逐渐升高(P<0.05或P<0.01),血浆NO含量在肝脏缺血再灌注45分钟后明显下降(P<0.01)。Pur组肝脏缺血45分钟血浆ET浓度略有升高,NO含量明显下降,再灌注45分钟血浆ET浓度进一步升高,但显著低于与IR组同期水平(P<0.05),NO含量显著高于IR组同期水平(P<0.05)。
IR组血浆TXB2在肝脏缺血45分钟及再灌注45分钟均升高,血浆PGF1α在缺血再灌注45分钟时显著下降。Pur组血浆TXB2略有增加,PGF1α有下降,而且与IR组再灌注45分钟时比较,血浆TXB2、PGF1α间均有显著性差异(P<0.05)。
IR组血浆Ptmax,PtS明显增加,PtT显著缩短,尤以再灌注45分钟时最为显著(P<0.01或P<0.05).Pur组血浆Ptmax,PtS,PtT虽增加,但均无显著性差异(P>0.05);而且与IR组再灌注45分钟时比较,Ptmax,PtT,PtS间均有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。
6.血浆SOD、NO及肝组织ATP与血浆ALT之间呈显著负相关;血浆XO、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、ET、TXB2、Ptmax及肝组织ADP,AMP与血浆ALT之间呈显著正相关(P<0.01);血浆GSH-Px、PGF1α、PtS、PtT与血浆ALT呈无相关。
7.对照组肝脏组织结构完整,肝细胞排列整齐,无变性坏死,无中性粒细胞浸润。缺血再灌注组肝细胞明显膨大,核固缩,胞浆变透亮,呈水样变性,线粒体空泡样变,部分肝细胞崩解、坏死,伴中性粒细胞灶性浸润。葛根素组肝组织损伤明显减轻,肝小叶结构基本正常,近中央静脉部分肝细胞浊肿变性,无肝细胞坏死。
结论:葛根素对肝脏缺血再灌注损伤有较好的防治作用。其防治作用的机制:1、葛根素能降低黄嘌呤氧化酶(XO)活性,减少氧自由基的生成,并且能增强超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等抗氧化酶的活性,清除氧自由基,抑制脂质过氧化反应,从而有效减轻肝脏的缺血再灌注损伤。
2、葛根素能减少肝细胞ATP分解,增加ATP生成而延缓ATP的衰竭,加强肝细胞能量储备,从而对缺血再灌注的肝细胞起到保护作用。
3、葛根素能抑制Kupffer细胞产生TNF-o,抑制内源性IL-1β,IL-6的释放,从而实现对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。
4、葛根素能调节NO/ET、TXA2/PGI2之间的平衡,抑制血小板聚集功能,改善肝脏微循环,从而起到防治肝脏缺血再灌注损伤。