【摘 要】
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人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)在1981年首次被发现,从发现到现在HIV的传播速率飞快以至于在全世界蔓延开来。截止目前,尚未研制出药效显著且成本低廉
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人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)在1981年首次被发现,从发现到现在HIV的传播速率飞快以至于在全世界蔓延开来。截止目前,尚未研制出药效显著且成本低廉的HIV药物,研发预防和治疗HIV的有效药物成为各国的研究热点。从抑制病毒复制和延长患者生存时间的角度看高效抗逆转录病毒疗法(Highly active anti-retroviral therapy,HAART)有着较好的效果,却有副作用大、价格昂贵,容易产生耐药性等缺点。相对而言,在HIV感染前采取预防措施是一种十分经济有效的途径。根据对以往流行的传染病控制的经验,针对HIV传染的有效HIV疫苗则成为首选。抗原刺激淋巴细胞活化时程序性死亡因子1(PD-1,programmed death-1)被诱导表达,其是一个表达在T细胞表面的免疫抑制性受体。PD-1的配体(PD-L)对静息T细胞起着共刺激作用,T细胞上的PD-1受体被诱导表达时,PD-L与PD-1结合而介导免疫负调控,使免疫反应不至于过度。所以,PD-1的配体特别是PD-L1在维持外周免疫耐受过程中占据着重要的地位。运用可溶性PD-1(sPD-1)与PD-L1结合在DNA疫苗对于抗原递呈和T Cell信号途径探究有重要作用,通过此途径不仅能够提高机体的抗原摄入量,有效减少免疫次数和降低抗原使用量,而且可以增强免疫效果,有助于减轻患者因为治疗带来的经济负担且增强病人的适应性。另外,这个信号通路能够快速有效提高机体效应记忆性CD8+T细胞诱导的免疫记忆应答的速度,这在早期有效保护机体免受病毒的入侵中起着关键的作用,同时也给研制抗HIV的DNA疫苗供应新思路。基于HIV包膜糖蛋白(Env)的抗体有可能会成为HIV保护性抗体,并且广谱中和抗体与Env相互作用才可以有效抑制HIV感染。用HIV Env作为抗原的疫苗,能够有效刺激免疫细胞产生高滴度抗Env抗体,同时引起较强的细胞免疫。将sPD-1与Env基因融合,构建HIV DNA疫苗,树突细胞通过PD-1特异性摄入HIV Env抗原,避免Env结合B细胞所导致的体液免疫抑制;运用树突细胞能将抗原交错递呈CD8和CD4细胞的功能,可以增强体液免疫和细胞免疫应答的有效性。本文旨在构建并表达含有小鼠sPD-1和HIV-1 ENV的DNA疫苗,并建立相应的生产工艺与纯化工艺,确定检测方法,为该疫苗的中试生产奠定基础。目前构建并表达成功四种质粒,初步摸索总结出培养基配制比例,发酵条件,纯化方式的选择,并且建立相应的检测和质量控制方法。
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