白色紫锥菊不定根培养及抗炎特性的研究

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白色紫锥菊是具有极高药用价值和观赏价值的多年生草本植物。国内没有其野生资源,且引种后不同地区人工栽培的白色紫锥菊品质差异较大,难以满足市场需求。因此,以白色紫锥菊不定根作为产品生产的原材料具有十分重要意义。为了提高不定根生物量和有效物质积累,本文对白色紫锥菊不定根培养条件进行了优化。研究采用单因素和均匀设计试验对培养基组分进行了筛选。单因素试验结果发现最佳的磷浓度为0.94 mM,氮浓度为45 mM,硝态氮和铵态氮浓度比为37.5mM/7.5mM。采用3因素(氮、磷和蔗糖)12 水平(浓度)进行均匀试验,发现不定根生物量和有效物质积累最佳的组合为氮浓度45 mM、磷浓度1.56 mM和蔗糖浓度50 g·L-1,总酚和黄酮生产量分别达到297.91 mg·L-1和211.94 mg·L-1。进一步利用生物反应器进行了不定根培养动态研究,发现0~10 d为不定根生长的延迟期,10~30d为指数生长期,30~50 d为平稳期。在培养30 d时不定根生长和有效物质积累最多,鲜物重和干物重分别为304.28 g和29.82 g,而总酚和黄酮生产量分别达到398.99 mg·L-1和280.57 mg·L-1。因此,可确定30 d为白色紫锥菊不定根生物反应器培养的最佳培养周期。在体外抗炎试验中,进行了不定根提取物对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)促炎介质释放的影响研究。不同浓度提取物对几种促炎介质的抑制程度有差异,但浓度为100 pg·L-1时,对一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的产生以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达均具有显著抑制作用。进一步,本研究探究了不定根提取物对核转录因子(NF)-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)两种信号通路相关蛋白表达的影响,结果发现不定根提取物(25~100μg·mL-1)对NF-κB信号通路中的NF-κB抑制蛋白(IκB)-α表达无明显影响,但可显著降低MAPKs信号通路中的p38、ERK和JNK蛋白的磷酸化水平,表明白色紫锥菊不定根是通过调控MAPKs信号通路发挥抗炎作用。
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