【摘 要】
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目的：筛选抗甲型流感病毒核蛋白(NP)的单克隆抗体,建立简便有效的快速检测甲型流感病毒的胶乳免疫层析方法(LICA)。方法：分别利用BCA法和SDS-PAGE法测定抗甲型流感病毒的6个单
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目的：筛选抗甲型流感病毒核蛋白(NP)的单克隆抗体,建立简便有效的快速检测甲型流感病毒的胶乳免疫层析方法(LICA)。方法：分别利用BCA法和SDS-PAGE法测定抗甲型流感病毒的6个单克隆抗体的蛋白浓度以及纯度,然后将间接酶联免疫法和胶体金免疫层析法相结合对6个单克隆抗体进行抗体的亲和力和特异性的鉴定,筛选获得一对抗体用于建立检测甲型流感病毒的胶乳免疫层析试剂,并对试纸条的灵敏度,特异性,稳定性,重复性进行鉴定,并用其检测349份临床样本,同时与病毒培养法和PCR法进行比较,验证LICA法检测甲型流感病毒抗原的灵敏度、特异性和可靠性。结果：成功筛选出最佳抗体配对—AF2和AF4,建立了胶乳免疫层析的检测方法,其检测灵敏度可达胶体金试剂的5倍,检测的349份临床样本中,相对于PCR确证的91份阳性样本,试剂盒的阳性符合率可达59.34%,阴性符合率达100%,与病毒培养法相比较,阳性符合率为67.44%,阴性符合率为91.83%。结论：利用筛选获得的抗甲型流感病毒NP蛋白的单克隆抗体成功建立了胶乳免疫层析的检测方法,操作简单、方便、快速,特异性、敏感性均较高,在临床患者流感病毒感染的检测中具有较好的应用价值。
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