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本研究以紫芝(Ganoderma sinense)为原料,分别采用常规水浴浸提法、超声波协助水提法和超临界二氧化碳萃取协同水提法提取紫芝多糖,对三种方法提取得到的紫芝粗多糖进行体外抗氧化及抗肿瘤实验,选取活性较强的紫芝粗多糖进一步分离纯化,对纯化后得到的多糖各组分进行纯度鉴定、分子量测定及进一步的活性研究。1实验内容(1)采用不同方法提取紫芝多糖分别采用水浴浸提、超声波协助水提和超临界C02萃取协助水提法提取紫芝多糖。(2)紫芝多糖提取工艺的优化通过测定紫芝粗多糖对羟基自由基(·OH)和·DPPH自由基的清除作用以及其对人食管癌细胞EC-109的24小时生长增殖抑制率,考察不同方法提取得到的紫芝粗多糖体外抗氧化及抗肿瘤的能力；确定多糖提取方法,进一步通过单因素试验和正交试验,优化得出紫芝多糖提取的最佳工艺条件。(3)脱色、脱蛋白工艺的研究以紫芝多糖的脱色率、脱蛋白率和多糖保留率3个指标的加权综合评分为依据,对AB-8、D-101、ADS-7和DM-301大孔吸附树脂,717阴离子交换树脂5种树脂进行比较,筛选出效果较好的树脂进行单因素试验及正交试验,得出紫芝多糖脱色、脱蛋白的最佳工艺条件。(4)紫芝多糖分离纯化和分子量的测定应用DEAE-52纤维素离子交换柱层析及Sephadex G-150凝胶过滤柱层析对脱色、脱蛋白后的紫芝多糖进一步分离纯化,通过高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)对精制紫芝多糖组分进行纯度鉴定及相对分子质量的测定。(5)紫芝多糖生物活性的研究通过考察各级分多糖对·OH和·DPPH自由基的清除效果及其对人食管癌细胞EC-109的24小时生长增殖抑制率,研究分离纯化得到的三个紫芝多糖(GSP)组分抗氧化及抗肿瘤的能力。2实验结果(1)水浴浸提和超声波协助水提得到的紫芝粗多糖外观一样,均呈棕褐色粉末状；超临界C02萃取协助水提紫芝粗多糖颜色稍浅,呈淡褐色,三者提取率无显著差异。体外抗氧化及抗肿瘤实验表明：水浴浸提法得到的紫芝粗多糖,在其浓度为2.5mg/mL时,对·OH和(?)·DPPH自由基的清除率分别为87.76%和75.14%；浓度为80mg/L时,对人食管癌细胞EC-109生长增殖24h抑制率达35.31%,其抗氧化及抗肿瘤效果均优于其他两种方法,说明水浴浸提法得到的紫芝粗多糖活性较高。(2)本实验采用水浴浸提法提取紫芝多糖,通过单因素实验及正交试验,优化得到紫芝多糖水浴浸提最佳工艺条件：液料比20:1(mL/g),提取温度90℃,提取时间2h,提取率为4.23%。(3)以脱色率、脱蛋白率和多糖保留率三项指标综合评分为依据,筛选出效果较好的树脂为：ADS-7大孔吸附树脂。进一步通过单因素实验及正交试验,确定其脱色、脱蛋白的最佳条件为：紫芝多糖溶液浓度2.0mg/mL,料液比为0.03g/mL,温度40℃,静态吸附时间1.5h,紫芝多糖脱色率最高可达98.36%,脱蛋白率为90.20%,多糖保留率63.07%。(4)脱色脱蛋白后的紫芝多糖经DEAE-52纤维素离子交换柱层析和Sephadex G-150凝胶过滤柱层析进一步分离纯化,共得到了GSP1、GSP2和GSP3三个多糖分级组分,经HPGFC鉴定均为均一多糖,分子量分别为54200Da,2511.8Da,248.9Da。(5) GSP1、GSP2和GSP3均具有清除·OH及·DPPH的能力,其强弱顺序依次为：GSP1>GSP2>GSP3,在本实验考查浓度范围内,多糖清除能力与其浓度呈现一定的量效关系,GSP1在其浓度达至(?)2.5mg/mL时,对·OH及·DPPH的清除率分别为94.76%和87.69%；在对EC-109作用24h抑制率方面,GSP1、GSP2均显示出其有效作用,在浓度为80mg/L时,GSP1和GSP2的最大抑制率分别为48.31%和25.33%,未发现GSP3对EC-109的明显抑制作用。